DAKIKI

DAKIKI est une lignée cellulaire lymphoblastoïde B humaine positive pour le virus d’Epstein-Barr (VEB) qui exprime l’IgA1 de surface et sécrète de l’IgA1 polymérique. Elle a été initialement dérivée de lymphocytes périphériques d’un patient adulte atteint d’un carcinome nasopharyngé, puis établie sous forme de culture en suspension à prolifération continue. Les cellules présentent une morphologie lymphoblastoïde typique et se développent dans des milieux à base de RPMI enrichis en sérum. DAKIKI est largement utilisée comme modèle de cellules B humaines productrices d’IgA1, en particulier pour les études portant sur la synthèse des immunoglobulines, la régulation de la sécrétion et la glycosylation post-traductionnelle.

Des analyses biochimiques et basées sur des lectines ont démontré que l’IgA1 sécrétée par les cellules DAKIKI présente des glycanes O-liés déficients en galactose au sein de la région charnière. L’analyse de la composition en monosaccharides et le test ELISA à base de lectine confirment l’enrichissement en résidus terminaux ou en résidus de N-acétylgalactosamine (GalNAc) α2,6-sialylés, une glycoforme caractéristique de l’IgA1 glycosylée de manière anormale observée dans la néphropathie à IgA. Le traitement à la neuraminidase augmente considérablement la réactivité de l’agglutinine Helix aspersa, ce qui indique la présence de structures de GalNAc sialylées. Des essais fonctionnels utilisant des fractions enrichies en appareil de Golgi provenant de cellules DAKIKI démontrent une activité α2,6-sialyltransférase CMP-NeuAc:GalNAc-IgA1, confirmant la capacité de ces cellules à sialyler directement des O-glycanes déficients en Gal. Des analyses transcriptionnelles révèlent l’expression de ST6-GalNAcII, mais non de ST6-GalNAcI, ce qui corrobore le rôle de ST6-GalNAcII dans la médiation de la sialylation α2,6 du GalNAc de la région charnière de l’IgA1.

Outre son utilité dans la recherche sur la glycosylation, DAKIKI a été évalué quant à sa réactivité aux facteurs inducteurs de cellules B et aux esters de phorbol, qui peuvent moduler la sécrétion d’immunoglobulines dans certaines lignées de cellules B humaines. Bien que DAKIKI sécrète de l’IgA de manière constitutive, elle a été incluse parmi les modèles de cellules B transformées par l’EBV utilisés pour étudier la régulation de la production d’immunoglobulines et les états de différenciation. Grâce à son profil de sécrétion d’IgA1 stable et à sa production reproductible de glycanes de la région charnière déficients en galactose et α2,6-sialylés, DAKIKI constitue un système in vitro bien caractérisé pour l’étude des mécanismes de glycosylation de l’IgA1, la différenciation des cellules B et la pathogenèse moléculaire des troubles associés à l’IgA.

37 °C, 5 % _de CO_₂, atmosphère humidifiée.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

Pour une conservation à long terme, placez les flacons dans de l’azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre environ −150 et −196 °C. L’entreposage à −80 °C n’est acceptable qu’à titre d’étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l’azote liquide.

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées dans de la glace sèche, dans un emballage isotherme validé contenant suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d’environ −78 °C pendant tout le transport. À la réception, inspectez immédiatement le conteneur et transférez sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

Chez Cytion, nous garantissons la qualité et la viabilité de nos produits. Nous garantissons que nos cellules seront viables au début de la culture pendant 60 jours à compter de leur expédition depuis nos installations. Nous assurons que tous les matériaux sont conformes aux spécifications décrites dans le certificat d’analyse et/ou la fiche technique du produit.

Pour plus de détails, veuillez consulter notre déclaration de garantie.