HaCaT

Les cellules HaCaT constituent un modèle essentiel dans la recherche dermatologique, permettant de mieux comprendre les mécanismes complexes de la biologie et de la pathologie cutanées. La lignée cellulaire HaCaT, immortalisée spontanément, est dérivée de cellules épidermiques humaines adultes et conserve la capacité de proliférer et de se différencier, à l’instar des kératinocytes basaux in vivo. Les cellules HaCaT constituent une plateforme fiable pour l’étude du processus de différenciation épidermique et l’analyse des marqueurs de différenciation épidermique essentiels au maintien de l’intégrité cutanée.

La susceptibilité des cellules HaCaT à l’apoptose et leur sensibilité aux agents induisant l’apoptose font l’objet d’études approfondies, en particulier dans le contexte d’agents cytotoxiques comme le RIPL. Les chercheurs évaluent la cytotoxicité de ces agents ainsi que l’ampleur de cette cytotoxicité à l’aide de cellules HaCaT, en recourant à des techniques telles que la microscopie à fluorescence pour visualiser les changements cellulaires.

Les chercheurs ont exploité les cellules HaCaT pour examiner les effets de divers agents, y compris les substrats antimicrobiens, ainsi que leur influence sur la viabilité cellulaire. Ces cellules constituent un excellent substrat pour tester les biomatériaux antimicrobiens et les substrats antimicrobiens à base d’atélocollagène, essentiels à la réparation cutanée et aux applications médicales.

La lignée épidermique HaCaT joue également un rôle crucial dans l’étude de la sénescence cellulaire, des cytokines et des profils d’expression génique liés au vieillissement et aux maladies chroniques. Les profils transcriptionnels des cellules HaCaT, y compris le rôle de κB et des microARN, fournissent des informations sur les mécanismes de régulation au niveau moléculaire.

La lignée de kératinocytes HaCaT, grâce à ses caractéristiques propres aux kératinocytes épidermiques, offre un système facile à manipuler pour analyser les interactions complexes entre les cellules épidermiques et le système immunitaire, en particulier le rôle des kératinocytes dans les états pathologiques. Elles permettent d’étudier les modifications épigénétiques et leur influence sur la différenciation des kératinocytes, y compris la formation de l’enveloppe cornifiée, un élément clé de la fonction de barrière cutanée.

En résumé, les cellules HaCaT constituent un modèle indispensable à la recherche dermatologique, facilitant une compréhension plus approfondie de la biologie et de la pathologie cutanées grâce à leur ressemblance avec les kératinocytes basaux et à leur capacité à se multiplier et à se différencier. Leur application s’étend de l’étude de la différenciation épidermique et des effets antimicrobiens à l’exploration de réponses cellulaires telles que l’apoptose, ce qui en fait une pierre angulaire de la biologie cellulaire et de la recherche biomédicale.

37 °C, 5 % _de CO_₂, atmosphère humidifiée.

1. Éliminer l’ancien milieu de culture : Retirer avec précaution l’ancien milieu de culture des flacons.
2. Laver les cellules : Ajouter 3 à 5 ml de solution saline tamponnée au phosphate (PBS) sans calcium ni magnésium dans les flacons T25, ou 5 à 10 ml dans les flacons T75, pour rincer les cellules adhérentes.
3. Ajouter la solution d’EDTA : Recouvrir entièrement la couche cellulaire d’une solution d’EDTA à 0,05 % fraîchement préparée. Utiliser 1 à 2 ml pour les flacons T25 et 2,5 ml pour les flacons T75.
4. Incubation : Incuber les flacons à 37 °C pendant 10 minutes.
5. Ajouter la solution de trypsine/EDTA ou de TrypLE Express : Après l’incubation, ajouter une solution de trypsine/EDTA fraîchement préparée (0,05 % de trypsine, 0,025 % d’EDTA) ou du TrypLE Express dans les flacons, en veillant à ce que la couche cellulaire soit entièrement recouverte. Utilisez 1 ml pour les flacons T25 et 2,5 ml pour les flacons T75. (Remarque : les étapes 3 et 4 peuvent être omises si vous utilisez TrypLE Express.)
6. Surveiller le détachement : Observer les cellules au microscope. Les cellules devraient se détacher en 1 à 5 minutes.
7. Neutraliser la trypsine : Ajouter du milieu de culture cellulaire contenant du sérum fœtal bovin (SFB) pour neutraliser l’activité de la trypsine dès que les cellules se sont détachées.
8. Transférer les cellules : Distribuer la suspension cellulaire dans de nouveaux flacons préremplis de milieu de culture frais.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes par luminescence.

Afin de s’assurer qu’il n’y a aucune contamination bactérienne, fongique ou par des levures, les cultures cellulaires font l’objet d’inspections visuelles quotidiennes.

Pour une conservation à long terme, placez les flacons dans de l’azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre environ −150 et −196 °C. L’entreposage à −80 °C n’est acceptable qu’à titre d’étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l’azote liquide.

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées dans de la glace sèche, dans un emballage isotherme validé contenant suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d’environ −78 °C pendant tout le transport. À la réception, inspectez immédiatement le conteneur et transférez sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

Chez Cytion, nous garantissons la qualité et la viabilité de nos produits. Nous garantissons que nos cellules seront viables au début de la culture pendant 60 jours à compter de leur expédition depuis nos installations. Nous assurons que tous les matériaux sont conformes aux spécifications décrites dans le certificat d’analyse et/ou la fiche technique du produit.

Pour plus de détails, veuillez consulter notre déclaration de garantie.