HCT116-Luc

HCT 116-Luc est un dérivé de la lignée cellulaire HCT 116, issue d’un carcinome colorectal humain, qui exprime la luciférase. Cette lignée a été générée par transduction à l’aide d’un construct codant pour la luciférase de la luciole Photinus pyralis, associé à une cassette de résistance à la puromycine (pac); l’expression du rapporteur est donc constitutive plutôt que dépendante d’une voie métabolique. Le signal bioluminescent est donc proportionnel au nombre de cellules viables, ce qui rend ce modèle adapté au suivi non invasif de la charge tumorale in vivo ainsi qu’à la quantification rapide, sur plaque, de la viabilité et de la prolifération cellulaires in vitro.

La lignée parentale HCT 116 conserve ses caractéristiques distinctives dans cette lignée dérivée, notamment l’instabilité microsatellitaire associée à un déficit de réparation des mésappariements de l’ADN, un gène TP53 de type sauvage et un caryotype quasi-diploïde. Son profil mutationnel comprend KRAS p.Gly13Asp, PIK3CA p.His1047Arg, une mutation hétérozygote CTNNB1 p.Ser45del qui stabilise la β-caténine et active la signalisation Wnt constitutive, ainsi que des mutations homozygotes par décalage du cadre de lecture dans TGFBR2 et ACVR2A, typiques des tumeurs colorectales présentant une instabilité des microsatellites (MSI). D’autres variants sont présents dans les gènes CDKN2A, EP300, BRCA2 et PPM1D. L’intégration stable du gène rapporteur permet l’imagerie longitudinale de xénogreffes orthotopiques et sous-cutanées chez le même animal, ce qui réduit la taille des cohortes et élimine la nécessité de critères d’évaluation finaux à chaque point temporel. La sélection à la puromycine est utilisée pour maintenir le transgène au cours de l’expansion de routine.

Cette lignée est largement utilisée en oncologie préclinique, dans les études d’efficacité d’agents cytotoxiques et ciblés, dans les modèles de métastases et de homing tumoral, ainsi que dans le criblage de cytotoxicité à haut débit où la lecture luminescente offre une plage dynamique plus large que les essais colorimétriques. Comme l’expression de la luciférase n’est pas sous contrôle inductible, le signal reflète le nombre de cellules et l’état métabolique plutôt que l’activité d’une voie spécifique; ainsi, les composés qui modifient les niveaux d’ATP ou le métabolisme cellulaire peuvent affecter la luminescence indépendamment de la destruction cellulaire. Des tests de viabilité orthogonaux sont recommandés à des fins de confirmation, et il convient de tenir compte du déficit en réparation des mésappariements de la lignée HCT 116 lors de l’interprétation des réponses aux agents endommageant l’ADN et aux traitements immunomodulateurs.

37 °C, 5 % _de CO_₂, atmosphère humidifiée.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes par luminescence.

Afin de s’assurer qu’il n’y a aucune contamination bactérienne, fongique ou par des levures, les cultures cellulaires font l’objet d’inspections visuelles quotidiennes.

Pour une conservation à long terme, placez les flacons dans de l’azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre environ −150 et −196 °C. L’entreposage à −80 °C n’est acceptable qu’à titre d’étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l’azote liquide.

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées dans de la glace sèche, dans un emballage isotherme validé contenant suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d’environ −78 °C pendant tout le transport. À la réception, inspectez immédiatement le conteneur et transférez sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

Chez Cytion, nous garantissons la qualité et la viabilité de nos produits. Nous garantissons que nos cellules seront viables au début de la culture pendant 60 jours à compter de leur expédition depuis nos installations. Nous assurons que tous les matériaux sont conformes aux spécifications décrites dans le certificat d’analyse et/ou la fiche technique du produit.

Pour plus de détails, veuillez consulter notre déclaration de garantie.