HCT116-Luc

HCT 116-Luc הוא נגזרת של קו התאים HCT 116, המקורו בסרטן המעי הגס האנושי, המבטאת לוקיפרז. הקו נוצר באמצעות טרנסדוקציה עם קונסטרוקט המקודד ללוציפרז של גחלילית (Photinus pyralis) יחד עם קסטת עמידות לפורומיצין (pac), כך שהביטוי של הרפורט הוא קונסטיטטיבי ולא תלוי במסלול. לפיכך, האות הביולומינסצנטי פרופורציונלי למספר התאים החיים, מה שהופך את המודל למתאים למעקב לא פולשני אחר עומס הגידול in vivo ולכימות מהיר, המבוסס על צלחות, של חיוניות התאים והתפשטותם in vitro.

קו ה-HCT 116 ההורי שומר על מאפייניו המגדירים בגרסה הנגזרת הזו, כולל חוסר יציבות במיקרו-סאטליטים עם תיקון לא תקין של אי-התאמות ב-DNA, TP53 מסוג הבר, וקריוטיפ כמעט דיפלואידי. הרקע המוטציוני שלו כולל KRAS p.Gly13Asp, PIK3CA p.His1047Arg, מוטציה הטרוזיגוטית ב-CTNNB1 p.Ser45del המייצבת את β-catenin ומניעה איתות Wnt קבוע, ומוטציות הומוזיגוטיות מסוג frameshift ב-TGFBR2 וב-ACVR2A, האופייניות לגידולים קולורקטליים עם MSI. מופיעים וריאנטים נוספים ב-CDKN2A, EP300, BRCA2 ו-PPM1D. שילוב יציב של הרפורט מאפשר הדמיה לאורך זמן של שתלים אורתוטופיים ותת-עוריים באותו בעל חיים, מה שמצמצם את גודל הקוהורטות ומבטל את הצורך בנקודות סיום סופיות בכל נקודת זמן. נעשה שימוש בברירה באמצעות פו-רומיצין לשמירה על הגן המהונדס במהלך התרבות שגרתית.

קו זה נמצא בשימוש נרחב באונקולוגיה פרה-קלינית, במחקרי יעילות של חומרים ציטוטוקסיים וממוקדים, במודלים של גרורות ו"הומינג" של גידולים, ובסינון ציטוטוקסיות בתפוקה גבוהה, שבו קריאה זוהרת מציעה טווח דינמי רחב יותר מאשר בדיקות קולורימטריות. מכיוון שביטוי לוקיפראז אינו נתון לשליטה הניתנת להשראה, האות מדווח על מספר התאים ועל מצבם המטבולי ולא על פעילותו של מסלול ספציפי; לפיכך, תרכובות המשנות את רמות ה-ATP או את חילוף החומרים התאי יכולות להשפיע על הזוהר ללא תלות בהרג התאים. מומלץ לבצע בדיקות חיוניות אורתוגונליות לאישור, ויש לקחת בחשבון את הרקע של חוסר תקינות בתיקון אי-התאמות ב-HCT 116 בעת פרשנות התגובות לחומרים הפוגעים ב-DNA ולטיפולים אימונומודולטוריים.

37°C, 5%_CO2, אווירה לחה.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

זיהום במיקופלסמה נשלל באמצעות בדיקות מבוססות PCR ושיטות זיהוי מיקופלסמה מבוססות לומניסצנציה.

כדי להבטיח שאין זיהום חיידקי, פטרייתי או שמרי, תרבויות התאים עוברות בדיקות ויזואליות יומיות.

לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי.

שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.

ב-Cytion, אנו עומדים מאחורי האיכות והכדאיות של המוצרים שלנו. אנו מבטיחים שתאינו יהיו קיימים בתחילת התרבית למשך 60 יום לאחר המשלוח מהמתקנים שלנו. אנו מבטיחים שכל החומרים תואמים למפרטים המתוארים בתעודת הניתוח ו/או בדף המוצר.

לפרטים מלאים, אנא עיינו ב <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">הצהרת האחריות שלנו