HCT116-Luc

HCT 116-Luc เป็นสายพันธุ์ที่แสดงลูซิเฟอเรส ซึ่งพัฒนาจากสายพันธุ์เซลล์มะเร็งลำไส้ใหญ่และทวารหนักของมนุษย์ HCT 116 สายเซลล์นี้ถูกสร้างขึ้นโดยการถ่ายโอนยีนด้วยคอนสตรัคต์ที่เข้ารหัสลูซิเฟอเรสของหิ่งห้อยจาก Photinus pyralis ร่วมกับคาสเซ็ตต์ต้านทานพูโรไมซิน (pac) ดังนั้นการแสดงออกของรีพอร์ตเตอร์จึงเป็นแบบคงที่ (constitutive) แทนที่จะขึ้นอยู่กับเส้นทางชีวภาพ ดังนั้น สัญญาณชีวเรืองแสงจึงเป็นสัดส่วนกับจำนวนเซลล์ที่ยังมีชีวิต ซึ่งทำให้โมเดลนี้เหมาะสมสำหรับการติดตามปริมาณเนื้องอกในร่างกาย (in vivo) แบบไม่รุกล้ำ และสำหรับการวัดปริมาณเซลล์ที่ยังมีชีวิตและการเพิ่มจำนวนเซลล์อย่างรวดเร็วบนแผ่นเพาะเลี้ยง (in vitro)

สายพันธุ์ HCT 116 ต้นแบบยังคงรักษาลักษณะเฉพาะตัวไว้ในสายพันธุ์ที่พัฒนาขึ้นนี้ รวมถึงความไม่เสถียรของไมโครแซทเทลไลต์พร้อมกับการซ่อมแซมความผิดพลาดของดีเอ็นเอที่บกพร่อง, TP53 แบบไวลด์ไทป์, และแบบโครโมโซมที่ใกล้เคียงกับไดพลอยด์ พื้นหลังการกลายพันธุ์ของมันประกอบด้วย KRAS p.Gly13Asp, PIK3CA p.His1047Arg, CTNNB1 p.Ser45del แบบเฮเทอโรไซกัสที่ช่วยเสถียรภาพของ β-catenin และกระตุ้นสัญญาณ Wnt แบบคงที่, รวมถึงการกลายพันธุ์แบบเฟรมชิฟต์แบบโฮโมไซกัสใน TGFBR2 และ ACVR2A ซึ่งเป็นลักษณะเฉพาะของมะเร็งลำไส้ใหญ่แบบ MSI. มีตัวแปรเพิ่มเติมใน CDKN2A, EP300, BRCA2 และ PPM1D การบูรณาการตัวรายงานอย่างมั่นคงช่วยให้สามารถถ่ายภาพตามแนวเวลาของ xenograft แบบ orthotopic และ subcutaneous ในสัตว์เดียวกันได้ ซึ่งช่วยลดขนาดกลุ่มตัวอย่างและขจัดความจำเป็นในการกำหนดจุดสิ้นสุดที่แต่ละช่วงเวลา การคัดเลือกด้วย Puromycin ใช้เพื่อรักษาทรานส์เจนไว้ระหว่างการขยายพันธุ์ตามปกติ

สายเซลล์นี้ถูกนำไปใช้อย่างแพร่หลายในด้านการวิจัยมะเร็งก่อนคลินิก ในการศึกษาประสิทธิภาพของสารก่อพิษต่อเซลล์และสารเป้าหมาย ในแบบจำลองการแพร่กระจายและการหาตำแหน่งของก้อนมะเร็ง รวมถึงในการคัดกรองความเป็นพิษต่อเซลล์แบบ high-throughput ซึ่งการอ่านค่าด้วยแสงเรือง (luminescent readout) ให้ช่วงไดนามิกที่กว้างกว่าการทดสอบแบบวัดสี (colorimetric assays) เนื่องจากการแสดงออกของลูซิเฟอเรสไม่อยู่ภายใต้การควบคุมแบบเหนี่ยวนำ สัญญาณจึงรายงานจำนวนเซลล์และสถานะการเผาผลาญมากกว่ากิจกรรมของเส้นทางชีวภาพเฉพาะ ดังนั้น สารที่เปลี่ยนแปลงระดับ ATP หรือการเผาผลาญของเซลล์จึงสามารถส่งผลต่อความเรืองแสงได้โดยไม่ขึ้นอยู่กับการทำลายเซลล์ แนะนำให้ใช้การทดสอบความมีชีวิตของเซลล์แบบออร์โธโกนัลเพื่อยืนยันผล และควรพิจารณาถึงพื้นหลังของ HCT 116 ที่ขาดระบบซ่อมแซมความไม่ตรงกัน (mismatch repair) เมื่อตีความผลการตอบสนองต่อสารที่ทำลาย DNA และการรักษาที่ปรับเปลี่ยนระบบภูมิคุ้มกัน

37°C, 5%_CO2, บรรยากาศชื้น

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

การปนเปื้อนของไมโคพลาสมาถูกตัดออกโดยใช้ทั้งการทดสอบแบบ PCR และการตรวจหาไมโคพลาสมาโดยใช้วิธีการเรืองแสง

เพื่อให้แน่ใจว่าไม่มีการปนเปื้อนของแบคทีเรีย เชื้อรา หรือยีสต์ การเพาะเลี้ยงเซลล์จะถูกตรวจสอบด้วยสายตาทุกวัน

สำหรับการเก็บรักษาในระยะยาว ให้วางหลอดบรรจุในไนโตรเจนเหลวในสถานะไอที่อุณหภูมิประมาณ −150 ถึง −196 °C การเก็บรักษาที่อุณหภูมิ −80 °C สามารถใช้ได้เฉพาะในระยะสั้นก่อนการย้ายไปยังไนโตรเจนเหลวเท่านั้น

เซลล์ไลน์ที่แช่แข็งในไนโตรเจนเหลวจะถูกจัดส่งในบรรจุภัณฑ์ที่ผ่านการตรวจสอบแล้วและมีการเก็บรักษาความเย็นด้วยน้ำแข็งแห้ง พร้อมสารทำความเย็นที่เพียงพอเพื่อรักษาอุณหภูมิประมาณ −78 °C ตลอดการขนส่ง เมื่อได้รับสินค้า ให้ตรวจสอบภาชนะทันทีและถ่ายโอนหลอดทดลองไปยังที่เก็บที่เหมาะสมโดยไม่ล่าช้า

ที่Cytion เรามุ่งมั่นในคุณภาพและความมีชีวิตของผลิตภัณฑ์ของเรา เรารับประกันว่าเซลล์ของเราจะยังมีชีวิตอยู่เมื่อเริ่มการเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 60 วันหลังจากจัดส่งจากโรงงานของเรา เรารับรองว่าวัสดุทั้งหมดเป็นไปตามข้อกำหนดที่ระบุไว้ใน ใบรับรองการวิเคราะห์ และ/หรือแผ่นข้อมูลผลิตภัณฑ์

สำหรับรายละเอียดเพิ่มเติม กรุณาดูที่ <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">นโยบายการรับประกัน.