HCT116-Luc

HCT 116-Luc 是人结直肠癌细胞系 HCT 116 的萤火虫荧光素酶表达衍生物。 该细胞系是通过转导表达蛾萤（Photinus pyralis）萤火虫荧光素酶的构建体以及嘌呤霉素抗性盒（pac）而产生的，因此报告基因的表达是恒定的，而非依赖于特定信号通路。 因此，生物发光信号与存活细胞数成正比，这使得该模型适用于体内肿瘤负荷的无创追踪，以及体外基于培养板的细胞存活率和增殖率的快速定量分析。

该衍生细胞系保留了亲本 HCT 116 细胞系的特征，包括伴有 DNA 错配修复缺陷的微卫星不稳定性、野生型 TP53 以及接近二倍体的核型。其突变背景包括 KRAS p.Gly13Asp、 PIK3CA p.His1047Arg、可稳定β-连环蛋白并驱动持续性Wnt信号传导的杂合性CTNNB1 p.Ser45del突变，以及TGFBR2和ACVR2A基因中典型的纯合性移码突变（常见于MSI型结直肠癌）。 此外，CDKN2A、EP300、BRCA2和PPM1D基因中也存在其他变异。报告基因的稳定整合使得在同一动物体内对原位和皮下异种移植瘤进行纵向成像成为可能，从而减少了研究队列规模，并免除了在每个时间点进行终点评估的必要。 在常规扩增过程中，采用嘌呤霉素筛选来维持转基因。

该细胞系广泛应用于肿瘤学临床前研究、细胞毒性和靶向药物的疗效研究、转移和肿瘤归巢模型，以及高通量细胞毒性筛选——在这些应用中，发光读数比比色法检测具有更宽的动态范围。 由于萤火虫蛋白的表达不受诱导调控，该信号反映的是细胞数量和代谢状态，而非特定通路的活性，因此，改变 ATP 水平或细胞代谢的化合物可能会影响发光，而与细胞杀伤无关。 建议采用正交存活率检测进行确认，并在解释对DNA损伤剂和免疫调节治疗的反应时，应考虑HCT 116细胞系在错配修复缺陷方面的背景。

37°C, 5%_CO2, 加湿环境。

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

使用基于 PCR 的检测方法和基于发光的支原体检测方法排除支原体污染。

为确保没有细菌、真菌或酵母菌污染，每天都要对细胞培养物进行目视检查。

如需长期保存，可将样品瓶放入气相液氮中，温度约为 -150 至 -196 ℃。在-80 °C下保存只能作为转入液氮前的短暂过渡。

冷冻保存的细胞系用干冰装运，并用经过验证的隔热包装和足够的制冷剂在整个运输过程中保持约 -78 °C 的温度。收到货后，应立即检查容器，并立即将小瓶转移到适当的储藏室。

在Cytion，我们保证产品的质量和活力。 我们保证，从我们的工厂发货后 60 天内，我们的细胞在开始培养时都是存活的。 我们保证所有材料均符合分析证书和/或产品说明书中描述的规格。

有关详细信息，请参阅我们的 <a href="" /Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">保修声明 。