HaCaT-ras A5

תאי HaCaT-ras A5 הם קו תאים של קרטינוציטים בעור האדם, שהפכו באופן ספונטני לבלתי מתים ואינם גורמים לגידולים, והם משמשים במחקר על אינטראקציות בסביבה המיקרו-סביבתית של הגידול ועל התקדמות קרצינומה בעור. תאים אלה, שמקורם בגבר לבן בן 62, עברו ברירה קלונלית ומוטגנזה, אשר בשילוב עם ויסות גורם גדילה אוטוקריני, מאפשרים היווצרות של גידולים ציסטיים שפירים, בעלי צמיחה איטית ומבדילים מאוד, בעכברי Balb/c-nu/nu. זה הופך אותם למודל חשוב לחקר הדינמיקה התאית והמנגנונים המולקולריים של התקדמות הגידול in vivo.

תאי HaCaT-ras A5 שימושיים במיוחד להבהרת האינטראקציות המורכבות בין תאי הגידול לתאי הסטרומה הסובבים אותם, כולל פיברובלסטים, תאי חיסון ותאי אנדותל. אינטראקציות אלה מתווכות על ידי הפרשת מולקולות איתות שונות, כגון גורמי גדילה, ציטוקינים ופרוטאזות, שביניהן אינטרלוקין-6 (IL-6) ממלא תפקיד מרכזי. ידוע כי IL-6 הופך לבלתי מבוקר בסוגים רבים של סרטן, בעיקר באמצעות ביטוי יתר או הפעלה מתמשכת של גורם השעתוק STAT3.

מחקרים הראו שגירוי IL-6 של תאי HaCaT-ras A5 מגביר באופן משמעותי את התרבותם באמצעות מסלול האיתות JAK/STAT, בעוד שתאי פיברובלסטים נותרים ללא השפעה בשל עיכוב חזק יותר על ידי SOCS3, רגולטור שלילי של מסלול זה. תגובה דיפרנציאלית זו תועדה במודל מתמטי המתאר את הדינמיקה של STAT3 ו-SOCS3, ומספק הבנה מעמיקה יותר של שרשראות איתות ספציפיות לתאים.

יתר על כן, IL-6 לא רק משפיע ישירות על התרבות תאי HaCaT-ras A5, אלא גם משפיע בעקיפין על הסביבה התאית באמצעות הפעלת רשת של גורמי גדילה כגון HGF, KGF, VEGF ו-IL-8. ניתוח ביטוי גנים של מעל 16,000 גנים גילה שגירוי IL-6 מעלה את הרגולציה של 19 גנים הקשורים למסלול האותות של אינטרפרון בתאי HaCaT-ras A5 ובפיברובלסטים, מה שמתאים לעיכוב הצמיחה שנצפה בפיברובלסטים.

גילוי תפקידו המכריע של SerpinB4 בשגשוג תאי HaCaT-ras A5, שאושר באמצעות ניסויי siRNA knockdown, מדגיש את הוויסות המורכב של IL-6 בתאי הגידול ובתאי הסטרומה. הבנה מקיפה זו של תפקידי IL-6 מגבירה את הפוטנציאל לפיתוח אסטרטגיות טיפוליות ממוקדות שמטרתן לווסת את מסלולי האיתות של IL-6 בסביבה המיקרו-סביבתית של הגידול.

בסך הכל, תאי HaCaT-ras A5 מהווים מודל יציב לחקר האינטראקציה המורכבת בתוך הסביבה המיקרו-סביבתית של הגידול, ומסללים את הדרך לגישות חדשות במחקר הסרטן ובפיתוח טיפולים.

37°C, 5%_CO2, אווירה לחה.

1. השלכת המדיום הישן: הסר את המדיום הישן מהבקבוקים.
2. שטוף את התאים: הוסף 3-5 מ"ל PBS (ללא סידן ומגנזיום) לבקבוקי T25, או 5-10 מ"ל לבקבוקי T75, כדי לשטוף את התאים הדבוקים.
3. הוסף תמיסת EDTA: כסה את שכבת התאים לחלוטין בתמיסת EDTA 0.05% שהוכנה זה עתה - השתמש ב-1-2 מ"ל לבקבוקי T25 ו-2.5 מ"ל לבקבוקי T75.
4. דגירה: דגרו את הבקבוקים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 10 דקות.
5. הוסף תמיסת טריפסין/EDTA: לאחר הדגירה, הוסף תמיסת טריפסין/EDTA טרייה (0.05% טריפסין, 0.025% EDTA) לבקבוקים, תוך הקפדה על כיסוי מלא של התאים - השתמש ב-1 מ"ל לבקבוקי T25 ו-2.5 מ"ל לבקבוקי T75.
6. עקוב אחר ההתנתקות: התבונן בתאים, אשר אמורים להתנתק תוך 1-2 דקות.
7. נטרול הטריפסין: הוסף תמיסת תרבית תאים המכילה FBS כדי לעצור את פעילות הטריפסין.
8. העברת תאים: מזגו את תמיסת התאים לתוך בקבוקים חדשים שמולאו מראש במדיום תרבית טרי.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

זיהום במיקופלסמה נשלל באמצעות בדיקות מבוססות PCR ושיטות זיהוי מיקופלסמה מבוססות לומניסצנציה.

כדי להבטיח שאין זיהום חיידקי, פטרייתי או שמרי, תרבויות התאים עוברות בדיקות ויזואליות יומיות.

לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי.

שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.

ב-Cytion, אנו עומדים מאחורי האיכות והכדאיות של המוצרים שלנו. אנו מבטיחים שתאינו יהיו קיימים בתחילת התרבית למשך 60 יום לאחר המשלוח מהמתקנים שלנו. אנו מבטיחים שכל החומרים תואמים למפרטים המתוארים בתעודת הניתוח ו/או בדף המוצר.

לפרטים מלאים, אנא עיינו ב <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">הצהרת האחריות שלנו