HaCaT-ras A5

HaCaT-ras A5 细胞是一种自发永生、不致癌的人类皮肤角质形成细胞系，在研究肿瘤微环境相互作用和皮肤癌进展方面发挥着重要作用。这些细胞源自一名 62 岁的高加索男性，经过克隆选择和诱变，再加上自分泌生长因子的调节，能在 Balb/c-nu/nu 小鼠体内形成生长缓慢、高度分化的良性囊肿。这使它们成为研究体内肿瘤进展的细胞动力学和分子机制的宝贵模型。

HaCaT-ras A5 细胞尤其有助于阐明肿瘤细胞与周围基质细胞（包括成纤维细胞、免疫细胞和内皮细胞）之间复杂的相互作用。这些相互作用是由生长因子、细胞因子和蛋白酶等各种信号分子的分泌介导的，其中白细胞介素-6（IL-6）起着至关重要的作用。众所周知，IL-6 在许多癌症类型中会失调，主要是通过 STAT3 转录因子的过度表达或持续激活。

研究表明，IL-6 对 HaCaT-ras A5 细胞的刺激会通过 JAK/STAT 信号通路显著增加其增殖，而成纤维细胞则不受影响，因为该通路的负调控因子 SOCS3 对其抑制作用更强。描述 STAT3 和 SOCS3 动态的数学模型捕捉到了这种不同的反应，从而加深了对细胞特异性信号级联的理解。

此外，IL-6 不仅直接影响 HaCaT-ras A5 细胞的增殖，还通过激活 HGF、KGF、VEGF 和 IL-8 等生长因子网络间接影响细胞环境。涉及 16,000 多个基因的基因表达分析表明，IL-6 刺激会上调 HaCaT-ras A5 细胞和成纤维细胞中与干扰素信号通路相关的 19 个基因，这与观察到的成纤维细胞生长抑制相关。

通过 siRNA 敲除实验证实了 SerpinB4 在 HaCaT-ras A5 细胞增殖中的关键作用，这一发现强调了 IL-6 在肿瘤细胞和基质细胞中错综复杂的调控作用。对IL-6作用的全面了解增强了开发旨在调节肿瘤微环境中IL-6信号通路的靶向治疗策略的潜力。

总之，HaCaT-ras A5 细胞为探索肿瘤微环境中复杂的相互作用提供了一个强大的模型，为癌症研究和治疗开发的新方法铺平了道路。

37°C, 5%_CO2, 加湿环境。

1. 丢弃旧培养基：去除烧瓶中的旧培养基。
2. 洗涤细胞：在 T25 烧瓶中加入 3-5 毫升 PBS（不含钙和镁），或在 T75 烧瓶中加入 5-10 毫升 PBS（不含钙和镁），以清洗粘附的细胞。
3. 加入 EDTA 溶液：用新配制的 0.05% EDTA 溶液完全覆盖细胞层--T25 烧瓶用 1-2 毫升，T75 烧瓶用 2.5 毫升。
4. 培养：在 37 摄氏度下培养 10 分钟。
5. 加入胰蛋白酶/EDTA 溶液：培养结束后，向烧瓶中加入新配制的胰蛋白酶/EDTA 溶液（0.05% 胰蛋白酶，0.025% EDTA），确保细胞被完全覆盖--T25 烧瓶用 1 毫升，T75 烧瓶用 2.5 毫升。
6. 监测脱落：观察细胞，细胞应在 1-2 分钟内脱离。
7. 中和胰蛋白酶：加入含 FBS 的细胞培养基以阻止胰蛋白酶的活性。
8. 转移细胞：将细胞悬液分装到预先注入新鲜培养基的新烧瓶中。

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

使用基于 PCR 的检测方法和基于发光的支原体检测方法排除支原体污染。

为确保没有细菌、真菌或酵母菌污染，每天都要对细胞培养物进行目视检查。

如需长期保存，可将样品瓶放入气相液氮中，温度约为 -150 至 -196 ℃。在-80 °C下保存只能作为转入液氮前的短暂过渡。

冷冻保存的细胞系用干冰装运，并用经过验证的隔热包装和足够的制冷剂在整个运输过程中保持约 -78 °C 的温度。收到货后，应立即检查容器，并立即将小瓶转移到适当的储藏室。

在Cytion，我们保证产品的质量和活力。 我们保证，从我们的工厂发货后 60 天内，我们的细胞在开始培养时都是存活的。 我们保证所有材料均符合分析证书和/或产品说明书中描述的规格。

有关详细信息，请参阅我们的 <a href="" /Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">保修声明 。