HaCaT-ras A5

HaCaT-ras A5 細胞是一種自發性永生化、無致瘤性的人類皮膚角質形成細胞系，對於研究腫瘤微環境的相互作用及皮膚癌的進展至關重要。 這些細胞源自一名 62 歲的白人男性，經過克隆選擇和突變處理，並結合自分泌生長因子的調節，可在 Balb/c-nu/nu 小鼠體內形成生長緩慢、高度分化的良性囊腫性腫瘤。 這使它們成為研究體內腫瘤進展的細胞動態與分子機制之寶貴模型。

HaCaT-ras A5 細胞對於闡明腫瘤細胞與周圍基質細胞（包括成纖維細胞、免疫細胞和內皮細胞）之間的複雜相互作用特別有用。 這些相互作用是由各種訊號分子的分泌所介導的，例如生長因子、細胞因子和蛋白酶，其中白細胞介素-6（IL-6）扮演著關鍵角色。已知在許多癌症類型中，IL-6 會出現調控失常，主要透過 STAT3 轉錄因子的過度表達或持續活化所致。

研究顯示，IL-6 刺激 HaCaT-ras A5 細胞後，會透過 JAK/STAT 訊號傳導路徑顯著增加其增殖；而成纖維細胞則因該路徑的負調節因子 SOCS3 產生更強效的抑制作用，因而不受影響。 這種差異性反應已被納入一個描述 STAT3 與 SOCS3 動態的數學模型中，有助於更深入地理解細胞特異性的訊號傳導級聯反應。

此外，IL-6 不僅直接影響 HaCaT-ras A5 細胞的增殖，還透過激活包括 HGF、KGF、VEGF 和 IL-8 在內的生長因子網絡，間接影響細胞環境。 針對超過 16,000 個基因的基因表達分析顯示，IL-6 刺激會同時在 HaCaT-ras A5 細胞和成纖維細胞中上調 19 個與干擾素訊號傳導路徑相關的基因，這與成纖維細胞中觀察到的生長抑制現象相吻合。

SerpinB4 在 HaCaT-ras A5 細胞增殖中扮演關鍵角色的發現，已透過 siRNA 敲低實驗得到證實，這凸顯了 IL-6 在腫瘤細胞和基質細胞中複雜的調控作用。 對 IL-6 作用機制的全面理解，增強了開發針對性治療策略的潛力，旨在調控腫瘤微環境中的 IL-6 訊號傳導路徑。

總體而言，HaCaT-ras A5 細胞為探索腫瘤微環境內的複雜相互作用提供了一個可靠的模型，為癌症研究與治療開發的新方法鋪平了道路。

37°C，5% CO_₂，加濕環境。

1. 棄置舊培養基：將舊培養基從培養瓶中倒出。
2. 洗滌細胞：向 T25 培養瓶中加入 3-5 毫升 PBS（不含鈣和鎂），或向 T75 培養瓶中加入 5-10 毫升，以洗滌貼壁細胞。
3. 加入 EDTA 溶液：用新調製的 0.05% EDTA 溶液完全覆蓋細胞層——T25 燒瓶使用 1-2 毫升，T75 燒瓶使用 2.5 毫升。
4. 孵育：將燒瓶於 37 攝氏度下孵育 10 分鐘。
5. 加入胰蛋白酶/EDTA 溶液： 孵育完成後，向培養瓶中加入新鮮配製的胰蛋白酶/EDTA 溶液（0.05% 胰蛋白酶，0.025% EDTA），確保細胞完全被覆蓋——T25 培養瓶使用 1 毫升，T75 培養瓶使用 2.5 毫升。
6. 監測細胞脫落：觀察細胞，細胞應在 1-2 分鐘內脫落。
7. 中和胰蛋白酶：加入含胎牛血清（FBS）的細胞培養基以停止胰蛋白酶活性。
8. 轉移細胞：將細胞懸浮液分裝至預先注入新鮮培養基的新培養瓶中。

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

透過基於 PCR 的檢測及基於發光原理的支原體檢測方法，排除支原體污染的可能性。

為確保無細菌、真菌或酵母菌污染，每日均會對細胞培養物進行目視檢查。

若需長期保存，請將試管置於溫度約為 −150 至 −196 °C 的氣相液氮中。僅在轉移至液氮之前，可將試管暫時存放於 −80 °C 環境中，作為短期過渡步驟。

冷凍保存的細胞系會以乾冰冷藏，並裝於經驗證的隔熱包裝中，包裝內含有足夠的冷媒，以確保在運輸過程中溫度維持在約 −78 °C。收到貨物後，請立即檢查容器，並盡快將試管轉移至適當的儲存場所。

在 Cytion，我們對產品的品質與存活率提供保障。 我們保證，自本公司設施出貨後 60 天內，我們的細胞在培養開始時仍具存活能力。 我們保證所有材料均符合 分析證明書及／或產品說明書中所載的規格。

詳情請參閱我們的 《保固聲明》。