HaCaT-ras A5

เซลล์ HaCaT-ras A5 เป็นเซลล์ไลน์ของเคราติโนไซต์ผิวหนังมนุษย์ที่ไม่ก่อให้เกิดเนื้องอกและเกิดความเป็นอมตะโดยธรรมชาติ มีบทบาทสำคัญในการศึกษาปฏิสัมพันธ์ระหว่างไมโครเอนไวรอนเมนต์ของเนื้องอกและการพัฒนาของมะเร็งผิวหนังเซลล์เหล่านี้มีต้นกำเนิดจากชายชาวคอเคเชียนอายุ 62 ปี ซึ่งได้ผ่านการคัดเลือกแบบโคลนและการกลายพันธุ์ ซึ่งเมื่อรวมกับการควบคุมปัจจัยการเจริญเติบโตแบบออโตไครน์ ทำให้สามารถก่อให้เกิดเนื้องอกซีสต์ชนิดไม่ร้ายแรงที่มีการเจริญเติบโตช้าและมีความแตกต่างสูงในหนู Balb/c-nu/nu การศึกษาเหล่านี้จึงเป็นแบบจำลองที่มีคุณค่าสำหรับการศึกษาพลวัตของเซลล์และกลไกโมเลกุลของการเจริญเติบโตของเนื้องอกในร่างกาย

เซลล์ HaCaT-ras A5 มีประโยชน์อย่างยิ่งในการอธิบายปฏิสัมพันธ์ที่ซับซ้อนระหว่างเซลล์มะเร็งกับเซลล์สโตรมาโดยรอบ รวมถึงไฟโบรบลาสต์ เซลล์ภูมิคุ้มกัน และเซลล์เยื่อบุหลอดเลือด ปฏิสัมพันธ์เหล่านี้ถูกควบคุมโดยการหลั่งสารส่งสัญญาณต่าง ๆ เช่น ปัจจัยการเจริญเติบโต ไซโตไคน์ และโปรตีเอส ซึ่งในจำนวนนี้ อินเตอร์ลิวคิน-6 (IL-6) มีบทบาทสำคัญอย่างยิ่งIL-6 เป็นที่ทราบกันดีว่ามีการควบคุมที่ผิดปกติในมะเร็งหลายชนิด โดยหลักแล้วเกิดจากการแสดงออกมากเกินไปหรือการกระตุ้นอย่างต่อเนื่องของปัจจัยการถอดรหัส STAT3

งานวิจัยได้แสดงให้เห็นว่าการกระตุ้น IL-6 ในเซลล์ HaCaT-ras A5 เพิ่มการเพิ่มจำนวนของเซลล์อย่างมีนัยสำคัญผ่านเส้นทางสัญญาณ JAK/STAT ในขณะที่ไฟโบรบลาสต์ไม่ได้รับผลกระทบเนื่องจากการยับยั้งที่รุนแรงกว่าโดย SOCS3 ซึ่งเป็นตัวควบคุมเชิงลบของเส้นทางนี้ การตอบสนองที่แตกต่างกันนี้ได้ถูกจับไว้ในแบบจำลองทางคณิตศาสตร์ที่อธิบายพลวัตของ STAT3 และ SOCS3 ซึ่งให้ความเข้าใจที่ลึกซึ้งยิ่งขึ้นเกี่ยวกับกระบวนการส่งสัญญาณเฉพาะของเซลล์

นอกจากนี้ IL-6 ไม่เพียงแต่ส่งผลโดยตรงต่อการเพิ่มจำนวนของเซลล์ HaCaT-ras A5 เท่านั้น แต่ยังส่งผลทางอ้อมต่อสภาพแวดล้อมของเซลล์ผ่านการกระตุ้นเครือข่ายของปัจจัยการเจริญเติบโต เช่น HGF, KGF, VEGF และ IL-8 อีกด้วยการวิเคราะห์การแสดงออกของยีนที่เกี่ยวข้องกับยีนมากกว่า 16,000 ยีน พบว่าการกระตุ้น IL-6 เพิ่มการแสดงออกของยีน 19 ยีนที่เกี่ยวข้องกับเส้นทางการส่งสัญญาณอินเตอร์เฟอรอนในทั้งเซลล์ HaCaT-ras A5 และไฟโบรบลาสต์ ซึ่งสอดคล้องกับการยับยั้งการเจริญเติบโตที่สังเกตได้ในไฟโบรบลาสต์

การค้นพบบทบาทสำคัญของ SerpinB4 ในการเพิ่มจำนวนของเซลล์ HaCaT-ras A5 ซึ่งได้รับการยืนยันผ่านการทดลองลดการแสดงออกของยีนด้วย siRNA แสดงให้เห็นถึงการควบคุมที่ซับซ้อนโดย IL-6 ในทั้งเซลล์เนื้องอกและเซลล์สโตรมา ความเข้าใจอย่างครอบคลุมเกี่ยวกับบทบาทของ IL-6 นี้ช่วยเพิ่มศักยภาพในการพัฒนาแนวทางการรักษาที่มุ่งเป้าไปที่การปรับเปลี่ยนเส้นทางการส่งสัญญาณของ IL-6 ในสภาพแวดล้อมจุลภาคของเนื้องอก

โดยรวมแล้ว เซลล์ HaCaT-ras A5 เป็นแบบจำลองที่มีความแข็งแกร่งสำหรับการสำรวจปฏิสัมพันธ์ที่ซับซ้อนภายในสภาพแวดล้อมจุลภาคของเนื้องอก ซึ่งเป็นการเปิดทางสู่แนวทางใหม่ในการวิจัยโรคมะเร็งและการพัฒนาการรักษา

37°C, 5%_CO2, บรรยากาศชื้น

1. ทิ้งสื่อเก่า: นำสื่อเก่าออกจากขวด
2. ล้างเซลล์: เติม PBS (ปราศจากแคลเซียมและแมกนีเซียม) 3-5 มล. ลงในขวด T25 หรือ 5-10 มล. ลงในขวด T75 เพื่อล้างเซลล์ที่เกาะติด
3. เติมสารละลาย EDTA: ปิดชั้นเซลล์ให้มิดด้วยสารละลาย EDTA 0.05% ที่เตรียมใหม่ - ใช้ 1-2 มิลลิลิตรสำหรับขวด T25 และ 2.5 มิลลิลิตรสำหรับขวด T75
4. การบ่ม: บ่มขวดแก้วที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 10 นาที
5. เติมสารละลายทริปซิน/EDTA: หลังจากการบ่ม ให้เติมสารละลายทริปซิน/EDTA ที่เตรียมสดใหม่ (ทริปซิน 0.05%, EDTA 0.025%) ลงในขวดเพาะเลี้ยง โดยให้แน่ใจว่าเซลล์ถูกปกคลุมอย่างทั่วถึง—ใช้ 1 มล. สำหรับขวด T25 และ 2.5 มล. สำหรับขวด T75
6. การสังเกตการหลุดลอก: สังเกตเซลล์ซึ่งควรจะหลุดออกภายใน 1-2 นาที
7. ทำให้ทริปซินเป็นกลาง: เติมอาหารเลี้ยงเซลล์ที่มี FBS เพื่อหยุดการทำงานของทริปซิน
8. ถ่ายเซลล์: ถ่ายสารแขวนลอยเซลล์ลงในขวดใหม่ซึ่งเติมอาหารเลี้ยงเชื้อสดไว้ล่วงหน้า

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

การปนเปื้อนของไมโคพลาสมาถูกตัดออกโดยใช้ทั้งการทดสอบแบบ PCR และการตรวจหาไมโคพลาสมาโดยใช้วิธีการเรืองแสง

เพื่อให้แน่ใจว่าไม่มีการปนเปื้อนของแบคทีเรีย เชื้อรา หรือยีสต์ การเพาะเลี้ยงเซลล์จะถูกตรวจสอบด้วยสายตาทุกวัน

สำหรับการเก็บรักษาในระยะยาว ให้วางหลอดบรรจุในไนโตรเจนเหลวในสถานะไอที่อุณหภูมิประมาณ −150 ถึง −196 °C การเก็บรักษาที่อุณหภูมิ −80 °C สามารถใช้ได้เฉพาะในระยะสั้นก่อนการย้ายไปยังไนโตรเจนเหลวเท่านั้น

เซลล์ไลน์ที่แช่แข็งในไนโตรเจนเหลวจะถูกจัดส่งในบรรจุภัณฑ์ที่ผ่านการตรวจสอบแล้วและมีการเก็บรักษาความเย็นด้วยน้ำแข็งแห้ง พร้อมสารทำความเย็นที่เพียงพอเพื่อรักษาอุณหภูมิประมาณ −78 °C ตลอดการขนส่ง เมื่อได้รับสินค้า ให้ตรวจสอบภาชนะทันทีและถ่ายโอนหลอดทดลองไปยังที่เก็บที่เหมาะสมโดยไม่ล่าช้า

ที่Cytion เรามุ่งมั่นในคุณภาพและความมีชีวิตของผลิตภัณฑ์ของเรา เรารับประกันว่าเซลล์ของเราจะยังมีชีวิตอยู่เมื่อเริ่มการเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 60 วันหลังจากจัดส่งจากโรงงานของเรา เรารับรองว่าวัสดุทั้งหมดเป็นไปตามข้อกำหนดที่ระบุไว้ใน ใบรับรองการวิเคราะห์ และ/หรือแผ่นข้อมูลผลิตภัณฑ์

สำหรับรายละเอียดเพิ่มเติม กรุณาดูที่ <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">นโยบายการรับประกัน.