HK-CRISPR-CAP-H-mEGFP

A linhagem celular HK-CRISPR-CAP-H-mEGFP é um modelo derivado de células humanas, desenvolvido para aplicações avançadas de edição genética e fluorescência. Essa linha celular é baseada em uma linha celular humana parental e foi modificada utilizando a tecnologia CRISPR-Cas9 para expressar o gene CAP-H (Proteína H Associada ao Cromossomo) marcado com a Proteína Fluorescente Verde Aprimorada monomérica (mEGFP). Essa modificação permite a visualização e o rastreamento precisos da CAP-H, um componente do complexo condensina, crucial para a condensação e estabilização cromossômica durante a divisão celular. A marcação com mEGFP fornece um sinal de fluorescência forte e estável, tornando essa linha celular ideal para imagens de células vivas e ensaios baseados em fluorescência.

A linhagem celular HK-CRISPR-CAP-H-mEGFP é particularmente valiosa para estudos sobre regulação do ciclo celular, mitose e dinâmica cromossômica. Os pesquisadores podem utilizar esse modelo para investigar os papéis dos complexos de condensina na manutenção da integridade cromossômica, especialmente durante fases críticas, como a metáfase e a anáfase. A integração estável da etiqueta mEGFP garante expressão consistente e resultados experimentais confiáveis, aumentando a reprodutibilidade entre diferentes estudos.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.