Přejít na obsah
NS3-CMPK-hLBR1TM-mEGFP
Tkáň
Endocervix
Nemoc
Adenokarcinom
Místo metastázy
Místo primárního nádoru (endocervix/děložní čípek)
Synonyma
HeLa R19 FlpIn TREx H2B-Cherry/NS3-CMPK-hLBR1TM-mEGFP

Dokumenty

NS3-CMPK-hLBR1TM-mEGFP

Cell line · Číslo výrobku 300986

Tato klonálně stabilní buněčná linie byla vytvořena transfekcí cirkulárního plazmidu a Flp-rekombinací, na kterou navázala selekce na základě rezistence vůči léčivům.

€800.00bez DPH a poštovného
Skladem
Lot
Doporučeno (nejčerstvější šarže)
1

01Obecné informace

Popis
Tato klonální stabilní buněčná linie byla vytvořena transfekcí cirkulárního plazmidu a rekombinací Flp s následnou selekcí na rezistenci k léčivům.
Tkáň
Endocervix
Nemoc
Adenokarcinom
Místo metastázy
Místo primárního nádoru (endocervix/děložní čípek)
Aplikace
Přestavba jaderné membrány; biologie receptoru laminu B (LBR); exprese genů indukovaná doxycyklinem; systém HeLa Kyoto FlpIn TREx; interakce mezi chromatinem a laminou; zobrazování živých buněk; studie podmíněného vyčerpání s využitím značení blízkosti zprostředkovaného NS3
Synonyma
  • HeLa R19 FlpIn TREx H2B-Cherry/NS3-CMPK-hLBR1TM-mEGFP

02Klasifikace

Organismus
Člověk
Sex
Žena
Růstové vlastnosti
Přívrženec
Stav GMO
GMO-S1
Podrobnosti o statusu GMO
GMO-S1: This HeLa R19 FlpIn TREx derivative contains Flp recombinase-integrated constructs encoding H2B-mCherry and doxycycline-inducible NS3-CMPK-hLBR1TM-mEGFP, with G418 resistance marker. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Úroveň biologické bezpečnosti
1

03Charakteristika

Morfologie
Epitelu podobné
Typ buňky
Epitelové buňky

04Identifikátory

Citace
NS3-CMPK-hLBR1TM-mEGFP (katalogové číslo Cytion 300986)
Daňové identifikační číslo NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_UR51

05Exprese a náchylnost

Exprese proteinů
H2B-mCherry a DOx indukovatelný NS3-CMPK-hLBR1TM-mEGFP

06Manipulace a chov

Pěstovací médium
DMEM, w: 4,5 g/l glukózy, w: 4 mM L-glutaminu, w: 3,7 g/l NaHCO3, w: 1,0 mM pyruvátu sodného (číslo výrobku Cytion 820300a)
Inkubační atmosféra

37 °C, 5 %CO2, zvlhčená atmosféra.

Doplňky stravy
Doplňte médium 10% FBS, 0,5 mg/ml G418
Disociační činidlo
Accutase
Subkultivace
Odstraňte staré médium z adherovaných buněk a promyjte je PBS bez vápníku a hořčíku. Pro baňky T25 použijte 3-5 ml PBS a pro baňky T75 5-10 ml. Poté buňky zcela zakryjte přípravkem Accutase, přičemž použijte 1-2 ml pro baňky T25 a 2,5 ml pro baňky T75. Nechte buňky inkubovat při pokojové teplotě po dobu 8-10 minut, aby se oddělily. Po inkubaci jemně promíchejte buňky s 10 ml média, aby byly znovu suspendovány, a poté je odstřeďte při 300xg po dobu 3 minut. Supernatant vyhoďte, buňky znovu rozpusťte v čerstvém médiu a přeneste je do nových baněk, které již obsahují čerstvé médium.
Obnova tekutin
2 až 3krát týdně
Rozmrazování a kultivace
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola kvality a kryokonzervace

Sterilita

Kontaminace mykoplazmaty je vyloučena jak pomocí testů založených na PCR, tak pomocí luminiscenčních metod detekce mykoplazmy.

Aby se zajistilo, že nedojde ke kontaminaci bakteriemi, plísněmi nebo kvasinkami, jsou buněčné kultury denně podrobovány vizuálním kontrolám.

Mrazicí médium
Jako kryokonzervační médium používáme kompletní růstové médium (včetně FBS) + 10 % DMSO pro zajištění dostatečné životaschopnosti po rozmrazení nebo CM-1 (katalogové číslo 800100 společnosti Cytion), které obsahuje optimalizované osmoprotektanty a metabolické stabilizátory pro zlepšení regenerace a snížení stresu způsobeného kryo.
Podmínky skladování

Pro dlouhodobé uchování umístěte lahvičky do kapalného dusíku v plynné fázi při teplotě přibližně -150 až -196 °C. Skladování při -80 °C je přijatelné pouze jako krátký přechodný krok před přemístěním do kapalného dusíku.

Dopravní podmínky

Kryokonzervované buněčné linie se přepravují na suchém ledu v ověřených, izolovaných obalech s dostatečným množstvím chladiva, aby se po celou dobu přepravy udržovala teplota přibližně -78 °C. Po obdržení ihned zkontrolujte obal a neprodleně přeneste lahvičky do vhodného skladu.

08Dárce

Věk dárce
30 let
Etnická příslušnost
Afroameričan