Siirry sisältöön
HK-CRISPR-Nup62-mEGFP
Kudos
Endocervix
Sairaus
Adenokarsinooma

Asiakirjat

HK-CRISPR-Nup62-mEGFP

Cell line · Tuotenumero 300659

The HK-CRISPR-Nup62-mEGFP cell line is a human cell model with the Nup62 gene tagged with monomeric Enhanced Green Fluorescent Protein (mEGFP). This modif...

€800.00ilman veroja ja toimituskuluja
Varastossa
Lot
Suositeltava (tuorein erä)
  • CoA
1

01Yleistä tietoa

Kuvaus

HK-CRISPR-Nup62-mEGFP-solulinja on ihmisen solumalli, jossa Nup62-geeni on merkitty monomeerisellä tehostetulla vihreällä fluoresoivalla proteiinilla (mEGFP). Tämä modifikaatio mahdollistaa Nup62:n reaaliaikaisen visualisoinnin ydinkuoren sisällä, mikä auttaa tutkimaan ydinkuljetusta, NPC-kokoonpanoa ja dynamiikkaa. Tarkka genomin muokkaus saavutettiin CRISPR-Cas9-tekniikalla, mikä tekee siitä luotettavan mallin Nup62:n roolin tutkimiseen soluprosesseissa.

Tämä solulinja on arvokas nukleosytoplasman kuljetuksen, solusyklin säätelyn ja ydinarkkitehtuurin tutkimuksessa. Nup62:n fluoresoiva merkintä mahdollistaa korkean resoluution kuvantamisen ja elävän solun seurannan, mikä helpottaa fluoresenssimikroskopiaa ja muita kuvantamistekniikoita. Tutkijat voivat tutkia ydin-sytoplasman vaihdon molekyylimekanismeja ja Nup62:n roolia sairauksissa, kuten syövässä ja neurodegeneratiivisissa häiriöissä.

Kudos
Endocervix
Sairaus
Adenokarsinooma

02Luokittelu

Organismi
Ihminen
Sukupuoli
Nainen
Kasvuominaisuudet
Kiinnittynyt
GMO-status
GMO-S1
GMO-statuksen tiedot
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains an mEGFP-tagged Nup62 generated via CRISPR, enabling imaging of central channel nuclear pore components. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Bioturvallisuustaso
1

03Ominaisuudet

Morfologia
Epiteelin kaltaiset solut, joilla on mosaiikkimaisen kiven muotoinen rakenne

04Tunnisteet

Lähdeviite
HK-CRISPR-Nup62-mEGFP (Cytionin luettelonumero 300659)
NCBI-verotunnus
9606
Tallettaja
Ellenbergin laboratorio (EMBL)

05Ilmentyminen ja alttius

Proteiinin ilmentyminen
Nup62, mEGFP-tag

06Käsittely ja viljely

Viljelyalusta
DMEM, w: 4,5 g/l glukoosia, w: 4 mM L-glutamiinia, w: 3,7 g/l NaHCO3, w: 1,0 mM natriumpyruvaattia (Cytionin artikkelinumero 820300a)
Inkubaatioilma

37 °C, 5 %CO2, kostutettu ilmakehä.

Ravintolisät
Täydennetään elatusainetta 10 %:lla FBS:llä
Dissosiaatioreagenssi
Accutase
Soluviljely
Poista vanha väliaine tarttuneista soluista ja pese ne PBS:llä, josta puuttuu kalsiumia ja magnesiumia. Käytä T25-pulloissa 3-5 ml PBS:ää ja T75-pulloissa 5-10 ml. Peitä sitten solut kokonaan Accutase-valmisteella, käyttäen 1-2 ml T25-pulloissa ja 2,5 ml T75-pulloissa. Anna solujen inkuboitua huoneenlämmössä 8-10 minuuttia solujen irtoamiseksi. Inkuboinnin jälkeen solut sekoitetaan varovasti 10 ml:n väliaineella niiden resuspendoimiseksi ja sentrifugoidaan sitten 300xg:n nopeudella 3 minuutin ajan. Hävitä supernatantti, suspendoi solut uudelleen tuoreeseen väliaineeseen ja siirrä ne uusiin pulloihin, jotka sisältävät jo tuoretta väliaineita.
Sulatus ja viljely
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Laadunvalvonta ja kryosäilytys

Hedelmättömyys

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Jäädytysaine
Kryosäilytysmediana käytämme täydellistä kasvualustaa (mukaan lukien FBS) + 10 % DMSO:ta riittävän sulatuksen jälkeisen elinkelpoisuuden varmistamiseksi tai CM-1:tä (Cytionin luettelonumero 800100), joka sisältää optimoituja osmoprotectantteja ja metabolisia stabilisaattoreita, jotka parantavat elpymistä ja vähentävät kryosäilytyksen aiheuttamaa stressiä.
Säilytysolosuhteet

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Toimitusehdot

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

08Lahjoittaja

Luovuttajan ikä
30 vuotta
Etnisyys
Afroamerikkalainen