Gå direkte til indholdet
HK-CRISPR-Nup62-mEGFP
Væv
Endocervix
Sygdom
Adenokarcinom

Dokumenter

HK-CRISPR-Nup62-mEGFP

Cell line · Varenummer 300659

The HK-CRISPR-Nup62-mEGFP cell line is a human cell model with the Nup62 gene tagged with monomeric Enhanced Green Fluorescent Protein (mEGFP). This modif...

€800.00ekskl. moms og fragt
På lager
Lot
Anbefalet (det nyeste parti)
  • CoA
1

01Generelle oplysninger

Beskrivelse

HK-CRISPR-Nup62-mEGFP-cellelinjen er en human cellemodel med Nup62-genet mærket med monomert Enhanced Green Fluorescent Protein (mEGFP). Denne modifikation giver mulighed for realtidsvisualisering af Nup62 inden for kernekappen, hvilket hjælper undersøgelser af nuklear transport, NPC-samling og -dynamik. Præcis genomredigering blev opnået ved hjælp af CRISPR-Cas9-teknologi, hvilket gør den til en pålidelig model til undersøgelse af Nup62's rolle i cellulære processer.

Denne cellelinje er værdifuld til forskning i nukleocytoplasmatisk transport, regulering af cellecyklus og nuklear arkitektur. Den fluorescerende mærkning af Nup62 muliggør billeddannelse i høj opløsning og sporing af levende celler, hvilket letter fluorescensmikroskopi og andre billeddannelsesteknikker. Forskere kan udforske de molekylære mekanismer i nuklear-cytoplasmatisk udveksling og Nup62's rolle i sygdomme som kræft og neurodegenerative lidelser.

Væv
Endocervix
Sygdom
Adenokarcinom

02Klassificering

Organisme
Menneske
Køn
Kvinde
Vækstegenskaber
Tilhænger
GMO-status
GMO-S1
Oplysninger om GMO-status
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains an mEGFP-tagged Nup62 generated via CRISPR, enabling imaging of central channel nuclear pore components. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biosikkerhedsniveau
1

03Egenskaber

Morfologi
Epithel-lignende celler med mosaikstenform

04Identifikatorer

Kildehenvisning
HK-CRISPR-Nup62-mEGFP (Cytion katalognummer 300659)
NCBI-skattenummer
9606
Indskyder
Ellenberg-laboratoriet (EMBL)

05Udtryk og modtagelighed

Proteinekspression
Nup62, mEGFP-tag

06Håndtering og opdræt

Næringsmedium
DMEM, w: 4,5 g/L glukose, w: 4 mM L-glutamin, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM natriumpyruvat (Cytion artikelnummer 820300a)
Inkubationsatmosfære

37°C, 5%CO2, befugtet atmosfære.

Kosttilskud
Suppler mediet med 10% FBS
Dissociationsreagens
Accutase
Oddyrkning
Fjern det gamle medium fra de klæbende celler, og vask dem med PBS, der ikke indeholder calcium og magnesium. Brug 3-5 ml PBS til T25-kolber og 5-10 ml til T75-kolber. Dæk derefter cellerne helt med Accutase, brug 1-2 ml til T25-kolber og 2,5 ml til T75-kolber. Lad cellerne inkubere ved stuetemperatur i 8-10 minutter for at løsne dem. Efter inkubationen blandes cellerne forsigtigt med 10 ml medium for at resuspendere dem, og centrifugeres derefter ved 300xg i 3 minutter. Kassér supernatanten, resuspender cellerne i frisk medium, og overfør dem til nye kolber, der allerede indeholder frisk medium.
Optøning og dyrkning
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitetskontrol og kryopræservering

Sterilitet

Mycoplasma-kontaminering udelukkes ved hjælp af både PCR-baserede assays og luminescensbaserede mycoplasma-detektionsmetoder.

For at sikre, at der ikke er nogen bakterie-, svampe- eller gærforurening, underkastes cellekulturerne daglige visuelle inspektioner.

Frysemedium
Som kryopræserveringsmedium bruger vi komplet vækstmedium (inklusive FBS) + 10 % DMSO for tilstrækkelig levedygtighed efter optøning eller CM-1 (Cytion-katalognummer 800100), som indeholder optimerede osmobeskyttende stoffer og metaboliske stabilisatorer for at forbedre genopretningen og reducere kryo-induceret stress.
Opbevaringsbetingelser

For langtidsopbevaring anbringes hætteglas i flydende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Opbevaring ved -80 °C er kun acceptabelt som et kort mellemtrin før overførsel til flydende nitrogen.

Leveringsbetingelser

Kryopræserverede cellelinjer sendes på tøris i valideret, isoleret emballage med tilstrækkeligt kølemiddel til at opretholde ca. -78 °C under hele transporten. Ved modtagelse skal beholderen straks inspiceres, og hætteglassene skal straks overføres til passende opbevaring.

08Donor

Donorens alder
30 år
Etnisk tilhørsforhold
Afroamerikaner