Ga naar de inhoud
HROBMC01
Weefsel
Colorectaal
Ziekte
Adenocarcinoom
Plaats van uitzaaiingen
Hersenen

Documenten

HROBMC01

Cell line · Productnummer 300800

This is one of a series of colorectal carcinoma cell lines which have been established by PD Dr. Michael Linnebacher since 2006. This line was established fr...

€800.00excl. btw en verzendkosten

Maatwerk / Aanbevelingen

Op bestelling gemaakt
1

01Algemene informatie

Beschrijving
Dit is een van een serie cellijnen voor colorectaal carcinoom die sinds 2006 zijn opgezet door PD Dr. Michael Linnebacher. Deze lijn is ontstaan uit een hersenmetastase van een primair colorectaal carcinoom.
Weefsel
Colorectaal
Ziekte
Adenocarcinoom
Plaats van uitzaaiingen
Hersenen
Toepassingen
Onderzoek naar hersenmetastasen bij colorectale kanker; biologie van metastasen van colorectale kanker naar de hersenen; modellering van PTEN-negatieve colorectale kanker; testen op gevoeligheid voor geneesmiddelen; biologie van hersenspecifieke metastatische colorectale kanker; HROC-onderzoeken met op patiënten afgestemde biobanken; mechanismen van metastasen in het centrale zenuwstelsel

02Classificatie

Organisme
Mens
Seks
Vrouw
Groei-eigenschappen
Aanhanger
GGO-status
Zonder genetisch gemodificeerde organismen
Details over de GGO-status
No genetic modification; wildtype patient-derived CRC brain metastasis cell line established by PD Dr. Linnebacher
Bioveiligheidsniveau
1

03Kenmerken

Morfologie
Epitheelachtig
Celtype
Epitheel
MSI-status
MSS
Verdubbelingstijd
30 uur

04Identificatiegegevens

Bronvermelding
HROBMC01 (Cytion catalogusnummer 300800)
NCBI-belastingnummer
9606
Cellosaurus
CVCL_1D08

05Expressie en vatbaarheid

Eiwit-expressie
PTEN-
Mutatieprofiel
P53 mut, APC mut, K-RasG12VA, N-Raswt, H-Raswt, PIK3CAwt, B-Rafwt

06Behandeling en kweek

Kweekmedium
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L Glucose, w: 2,5 mM L-Glutamine, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM Natriumpyruvaat, w: 1,2 g/L NaHCO3 (Cytion artikelnummer 820400a)
Incubatieomgeving

37°C, 5%CO2, bevochtigde atmosfeer.

Supplementen
Vul het medium aan met 10% FBS
Dissociatiereagens
Accutase
Heruitplanten
Verwijder het oude medium van de adherente cellen en was ze met PBS zonder calcium en magnesium. Gebruik voor T25-flesjes 3-5 ml PBS en voor T75-flesjes 5-10 ml. Bedek de cellen vervolgens volledig met Accutase, met 1-2 ml voor T25-flesjes en 2,5 ml voor T75-flesjes. Laat de cellen gedurende 8-10 minuten bij kamertemperatuur incuberen om ze los te maken. Na incubatie de cellen voorzichtig mengen met 10 ml medium om ze te resuspenderen en vervolgens centrifugeren bij 300xg gedurende 3 minuten. Gooi het supernatant weg, resuspendeer de cellen in vers medium en breng ze over in nieuwe kolven die al vers medium bevatten.
Splitsingsverhouding
1 tot en met 3
Zaaidichtheid
1 x 104 cellen/cm2
Vloeistofverversing
Om de 3 tot 5 dagen
Herstel na ontdooiing
Na ontdooien, zaai de cellen uit op 5 x 104 cellen/cm2 en laat de cellen minstens 48 uur herstellen van het invriesproces en zich hechten.
Ontdooien en kweken

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kwaliteitscontrole en cryopreservatie

Onvruchtbaarheid

Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden.

Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties.

Kweekmedium invriezen
Als cryoconserveringsmedium gebruiken we volledig groeimedium (inclusief FBS) + 10% DMSO voor voldoende levensvatbaarheid na het ontdooien, of CM-1 (Cytion catalogusnummer 800100), dat geoptimaliseerde osmoprotectanten en metabolische stabilisatoren bevat om het herstel te verbeteren en door cryo geïnduceerde stress te verminderen.
Opslagvoorwaarden

Voor langdurige bewaring plaatst u flesjes in vloeibare stikstof in dampfase bij ongeveer -150 tot -196 °C. Opslag bij -80 °C is alleen aanvaardbaar als korte tussenstap vóór overbrenging naar vloeibare stikstof.

Verzendvoorwaarden

Gecryopreserveerde cellijnen worden verzonden op droog ijs in gevalideerde, geïsoleerde verpakkingen met voldoende koelmiddel om gedurende het transport ongeveer -78 °C te handhaven. Inspecteer de verpakking onmiddellijk na ontvangst en breng de flacons onverwijld over naar de juiste opslagplaats.

08Donateur

Leeftijd van de donor
60 jaar
Etnische afkomst
Kaukasisch