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HROBMC01
Tessuto
Colorettale
Malattia
Adenocarcinoma
Sito metastatico
Cervello

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HROBMC01

Cell line · Codice prodotto 300800

This is one of a series of colorectal carcinoma cell lines which have been established by PD Dr. Michael Linnebacher since 2006. This line was established fr...

€800.00IVA e spese di spedizione escluse

Personalizzazione / Suggerimenti

Su ordinazione
1

01Informazioni generali

Descrizione
Questa è una delle linee cellulari di carcinoma colorettale create dal Dr. Michael Linnebacher dal 2006. Questa linea è stata creata a partire da una metastasi cerebrale di un carcinoma colorettale primario.
Tessuto
Colorettale
Malattia
Adenocarcinoma
Sito metastatico
Cervello
Applicazioni
Ricerca sulle metastasi cerebrali del carcinoma colorettale; biologia delle metastasi cerebrali del carcinoma colorettale; modellizzazione del carcinoma colorettale PTEN-negativo; test di sensibilità ai farmaci; biologia delle metastasi cerebrali specifiche del carcinoma colorettale; studi su biobanche con pazienti HROC abbinati; meccanismi delle metastasi nel sistema nervoso centrale

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Donna
Proprietà di crescita
Aderente
Presenza di OGM
Senza OGM
Dettagli sullo stato degli OGM
No genetic modification; wildtype patient-derived CRC brain metastasis cell line established by PD Dr. Linnebacher
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Simile all'epitelio
Tipo di cellula
Epiteliale
Stato MSI
MSS
Tempo di raddoppio
30 ore

04Identificatori

Riferimento bibliografico
HROBMC01 (numero di catalogo Cytion 300800)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_1D08

05Espressione e suscettibilità

Espressione proteica
PTEN-
Profilo mutazionale
P53 mut, APC mut, K-RasG12VA, N-Raswt, H-Raswt, PIK3CAwt, B-Rafwt

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L di glucosio, w: 2,5 mM di L-Glutammina, w: 15 mM di HEPES, w: 0,5 mM di Sodio piruvato, w: 1,2 g/L di NaHCO3 (articolo Cytion numero 820400a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Rapporto di frazionamento
da 1 a 3
Densità di semina
1 x 104 cellule/cm2
Rinnovo dei fluidi
Ogni 3-5 giorni
Recupero post-scongelamento
Dopo lo scongelamento, piastrare le cellule a 5 x 104 cellule/cm2 e lasciare che le cellule si riprendano dal processo di congelamento e aderiscano per almeno 48 ore.
Scongelamento e coltura

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Età dei donatori
60 anni
Etnia
Caucasico