Komórki HeLa

01Opis

02Informacje ogólne

Opis

Komórki HeLa, pochodzące z komórek raka szyjki macicy Henrietty Lacks, są nieśmiertelną linią komórkową szeroko stosowaną w badaniach biomedycznych. Ludzka linia komórkowa Hela znacząco przyczyniła się do znaczących postępów w badaniach i nadal odgrywa kluczową rolę w laboratoriach na całym świecie.

W 1951 roku Henrietta Lacks, młoda matka pięciorga dzieci, zgłosiła się do szpitala Johnsa Hopkinsa z powodu krwawienia z pochwy, gdzie dr Howard Jones zidentyfikował znaczny nowotwór złośliwy na jej szyjce macicy. W tym czasie Instytut Medycyny Johnsa Hopkinsa był jedną z niewielu instytucji oferujących opiekę medyczną zubożałym Afroamerykanom. Henrietta Lacks przeszła leczenie raka szyjki macicy radem, wiodącą dostępną wówczas terapią. Podczas leczenia przeprowadzono biopsję, a próbkę jej komórek rakowych wysłano do laboratorium dr George'a Otto Geya. Dr Gey próbował hodować komórki od pacjentów z rakiem szyjki macicy z różnych środowisk, ale bez powodzenia, aż do komórek Henrietty, które były pierwszymi komórkami, które proliferowały w sposób ciągły, co odróżniało je od wszystkich poprzednich próbek.

Później okazało się, że rak szyjki macicy Henrietty Lacks był spowodowany wirusem brodawczaka ludzkiego (HPV). HPV to powszechny wirus, który może prowadzić między innymi do raka szyjki macicy. Badania nad komórkami HeLa znacząco przyczyniły się do zrozumienia roli wirusa HPV w raku szyjki macicy, prowadząc do opracowania profilaktycznych szczepionek przeciwko HPV, które miały ogromny wpływ na zmniejszenie częstości występowania nowotworów związanych z HPV.

Te niezwykłe komórki, nazwane komórkami "HeLa" od inicjałów Henrietty Lacks, stały się instrumentalne w badaniach medycznych. Umożliwiły one naukowcom badanie wzrostu komórek nowotworowych, wpływu różnych substancji i działania wirusów, znacząco przyczyniając się do postępu w medycynie, w tym do opracowania szczepionek na polio i COVID-19, bez obaw etycznych związanych z bezpośrednimi eksperymentami na ludziach.

Komórki HeLa są szeroko stosowane do badań funkcji genów, produkcji białek rekombinowanych i terapii genowej ze względu na ich wysoką wydajność transfekcji i podatność na infekcje wirusowe. Odgrywają kluczową rolę w badaniach nad zachowaniami wirusów, w tym replikacją i patogenezą, a także odegrały kluczową rolę w badaniach nad wirusowym zapaleniem wątroby typu B poprzez ekspresję białek wirusowych i pomoc w opracowaniu testów diagnostycznych i szczepionek, tym samym znacznie przyspieszając globalne działania zdrowotne.

Komórki HeLa są nadal nieocenionym źródłem informacji dla trwających badań w medycynie i nauce. Znaczenie komórek HeLa i innych nieśmiertelnych linii komórkowych jest nie do przecenienia, ponieważ nadal kształtują one medycynę i badania nad chorobami zakaźnymi, a także stanowią trwałe dziedzictwo Henrietty Lacks i jej wkładu w rozwój nauki.

Chusteczka

Szyjka macicy

Choroba

Gruczolakorak

Zastosowania

Host transfekcji

Synonimy

• HELA
• Hela
• He La
• He-La
• Henrietta Lacks cells
• Helacyton gartleri

03Klasyfikacja

Organizm

Człowiek

Seks

Kobieta

Właściwości związane ze wzrostem

Zwolennik

Poziom bezpieczeństwa biologicznego

1

04Cechy charakterystyczne

Morfologia

Podobny do nabłonka

Karyotyp

Linia komórek HeLa, o złożonym kariotypie charakteryzującym się wysokim stopniem aneuploidii i rearanżacji strukturalnych, znana jest z szybkiego wzrostu i długowieczności w hodowli. Komórki HeLa mają zazwyczaj 82 chromosomy, choć ich liczba może wahać się od 70 do 164. Warto zauważyć, że 98% komórek HeLa posiada mały telocentryczny chromosom, a 100% wykazuje aneuploidię w znacznej liczbie badanych komórek. Te nieprawidłowości chromosomalne leżą u podstaw ich szybkiego wzrostu i nieśmiertelności, a także ich związku z rakiem szyjki macicy i innymi komórkami nowotworowymi.

Czas podwojenia

28 do 36 godzin

05Identyfikatory

Źródło

HeLa (numer katalogowy Cytion 300194)

Numer identyfikacji podatkowej NCBI

9606

Cellosaurus

CVCL_0030

06Ekspresja i podatność

Izoenzymy

G6PD, A

Podatność na wirusy

Ludzki adenowirus 3, wirus zapalenia mózgu i mięśnia sercowego, ludzki wirus polio 1, ludzki wirus polio 2, ludzki wirus polio 3

Transkryptaza odwrotna

Negatywny

Produkty

Keratyna, lizofosfatydylocholina (lizo-PC) indukuje aktywność AP-1 i aktywność c-końcowej kinazy c-jun (JNK1) poprzez szlak niezależny od kinazy białkowej C

07Postępowanie i hodowla

Pożywka hodowlana

EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-glutamina, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (numer artykułu Cytion 820100a)

Atmosfera inkubacyjna

37°C, 5%_CO2, nawilżona atmosfera.

Suplementy

Uzupełnić podłoże 10% FBS i 1% NEAA

Odczynnik dysocjacyjny

Accutase

Hodowla komórek w subkulturze

Usuń starą pożywkę z przylegających komórek i przemyj je PBS, który nie zawiera wapnia i magnezu. W przypadku kolb T25 należy użyć 3-5 ml PBS, a w przypadku kolb T75 5-10 ml. Następnie całkowicie pokryj komórki Accutase, używając 1-2 ml dla kolb T25 i 2,5 ml dla kolb T75. Pozwól komórkom inkubować w temperaturze pokojowej przez 8-10 minut, aby je oddzielić. Po inkubacji delikatnie wymieszaj komórki z 10 ml pożywki, aby ponownie je zawiesić, a następnie odwiruj przy 300xg przez 3 minuty. Odrzucić supernatant, ponownie zawiesić komórki w świeżej pożywce i przenieść je do nowych kolb zawierających już świeżą pożywkę.

Gęstość wysiewu

1 x 10⁴ kom^órek/cm²

Odnawianie płynów

2 do 3 razy w tygodniu

Powrót do stanu sprzed rozmrożenia

Po rozmrożeniu należy umieścić komórki w płytkach w ilości 2 do 3 x 10⁴ komórek/cm² i pozostawić je na co najmniej 24 do 48 godzin, aby mogły się zregenerować po procesie zamrażania i przylgnąć do podłoża.

Rozmrażanie i hodowla

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

08Kontrola jakości i kriokonserwacja

Bezpłodność

Zanieczyszczenie mykoplazmą jest wykluczane przy użyciu zarówno testów opartych na PCR, jak i metod wykrywania mykoplazmy opartych na luminescencji.

Aby upewnić się, że nie ma zanieczyszczenia bakteriami, grzybami lub drożdżami, hodowle komórkowe są poddawane codziennym kontrolom wizualnym.

Pożywka do zamrażania

Jako pożywki do kriokonserwacji używamy kompletnej pożywki wzrostowej (w tym FBS) + 10% DMSO w celu zapewnienia odpowiedniej żywotności po rozmrożeniu lub CM-1 (numer katalogowy Cytion 800100), która zawiera zoptymalizowane osmoprotektanty i stabilizatory metaboliczne w celu zwiększenia regeneracji i zmniejszenia stresu wywołanego kriokonserwacją.

Warunki przechowywania

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Warunki wysyłki

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.

09Darczyńca

Wiek dawcy

30 lat

Pochodzenie etniczne

Afroamerykanin

10Kwestie prawne i bezpieczeństwo

Środki bezpieczeństwa

Planując przechowywanie kriofiolek w ciekłym azocie w celu ich późniejszego rozmrożenia, należy bezwzględnie przestrzegać rygorystycznych środków bezpieczeństwa. Niezbędne są odpowiednie rękawice i odzież ochronna, a podczas przenoszenia zamrożonych próbek do lub ze zbiornika z ciekłym azotem wymagane jest stosowanie maski lub okularów ochronnych. Ma to na celu zmniejszenie ryzyka obrażeń spowodowanych potencjalnymi eksplozjami kriowialu podczas wyjmowania, które mogą skutkować wyrzuceniem ostrych fragmentów.

Gwarancja

W Cytion gwarantujemy jakość i żywotność naszych produktów. Gwarantujemy, że nasze komórki będą żywotne na początku hodowli przez 60 dni po wysyłce z naszych zakładów. Zapewniamy, że wszystkie materiały są zgodne ze specyfikacjami opisanymi w certyfikacie analizy i/lub karcie produktu

Szczegółowe informacje można znaleźć w naszej <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Oświadczeniu gwarancyjnym

Wymagana umowa o transferze materiałów

Tak