Prejsť na obsah
HK-CRISPR-mEGFP-Nup214
Tkanivo
Endocervix
Choroba
Adenokarcinóm

Dokumenty

HK-CRISPR-mEGFP-Nup214

Cell line · Číslo výrobku 300671

The HK-CRISPR-mEGFP-Nup214 cell line is designed to study Nup214, a key nuclear pore complex (NPC) component. Using CRISPR-Cas9, this cell line adds a mon...

€800.00bez DPH a poštovného
Na sklade
Lot
Odporúčané (najčerstvejšia várka)
  • CoA
1

01Všeobecné informácie

Popis

Bunková línia HK-CRISPR-mEGFP-Nup214 je určená na štúdium Nup214, kľúčovej zložky komplexu jadrových pórov (NPC). Pomocou CRISPR-Cas9 sa do tejto bunkovej línie pridáva značka monomérneho vylepšeného zeleného fluorescenčného proteínu (mEGFP), ktorá umožňuje vizualizáciu jeho úlohy v nukleocytoplazmatickom transporte a regulácii bunkového cyklu v reálnom čase.

Táto bunková línia zabezpečuje minimálne účinky mimo cieľa a umožňuje pokročilé zobrazovacie techniky na štúdium štruktúry a funkcie NPC. Je cenná na skúmanie nukleocytoplazmatického transportu a súvisiacich ochorení, ako sú niektoré leukémie, a je užitočná na skríning zlúčenín, ktoré ovplyvňujú funkciu NPC.

Tkanivo
Endocervix
Choroba
Adenokarcinóm

02Klasifikácia

Organizmus
Človek
Sex
Žena
Rastové vlastnosti
Prívrženec
Stav GMO
GMO-S1
Podrobnosti o štatúte GMO
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains a CRISPR-engineered mEGFP fusion at the Nup214 locus for studying nucleocytoplasmic transport. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Úroveň biologickej bezpečnosti
1

03Charakteristiky

Morfológia
Epitelové bunky s mozaikovým tvarom kameňa

04Identifikátory

Citácia
HK-CRISPR-mEGFP-Nup214 (katalógové číslo Cytion 300671)
Daňové identifikačné číslo NCBI
9606
Vkladateľ
Ellenbergova laboratória (EMBL)

05Prejav a náchylnosť

Expresia proteínov
Nup214, mEGFP-tag

06Manipulácia a kultivácia

Kultivačné médium
DMEM, w: 4,5 g/l glukózy, w: 4 mM L-glutamínu, w: 3,7 g/l NaHCO3, w: 1,0 mM pyruvátu sodného (číslo výrobku Cytion 820300a)
Inkubačná atmosféra

37 °C, 5 %CO2, zvlhčená atmosféra.

Doplnky stravy
Doplňte médium o 10 % FBS
Disociačné činidlo
Accutase
Rozmnožovanie kultúr
Odstráňte staré médium z adherovaných buniek a premyte ich PBS, ktorý neobsahuje vápnik a horčík. Pre banky T25 použite 3 - 5 ml PBS a pre banky T75 použite 5 - 10 ml. Potom bunky úplne pokryte Accutase, pričom použite 1 - 2 ml pre banky T25 a 2,5 ml pre banky T75. Nechajte bunky inkubovať pri izbovej teplote 8-10 minút, aby sa oddelili. Po inkubácii jemne premiešajte bunky s 10 ml média, aby boli znovu suspendované, a potom ich 3 minúty odstreďujte pri 300xg. Supernatant zlikvidujte, bunky znovu rozmiešajte v čerstvom médiu a preneste ich do nových fliaš, ktoré už obsahujú čerstvé médium.
Rozmrazovanie a kultivácia
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola kvality a kryokonzervácia

Sterilita

Kontaminácia mykoplazmami sa vylučuje pomocou testov založených na PCR a metód detekcie mykoplaziem založených na luminiscencii.

Aby sa zabezpečilo, že nedošlo ku kontaminácii baktériami, hubami alebo kvasinkami, bunkové kultúry sa denne vizuálne kontrolujú.

Mrazové médium
Ako kryokonzervačné médium používame kompletné rastové médium (vrátane FBS) + 10 % DMSO na zabezpečenie primeranej životaschopnosti po rozmrazení alebo CM-1 (katalógové číslo 800100 spoločnosti Cytion), ktoré obsahuje optimalizované osmoprotektanty a metabolické stabilizátory na zlepšenie obnovy a zníženie stresu spôsobeného kryo.
Podmienky skladovania

Na dlhodobé uchovávanie umiestnite injekčné liekovky do kvapalnej fázy dusíka v pare pri teplote približne -150 až -196 °C. Skladovanie pri teplote -80 °C je prijateľné len ako krátky prechodný krok pred presunom do tekutého dusíka.

Dopravné podmienky

Kryokonzervované bunkové línie sa prepravujú na suchom ľade v overených, izolovaných obaloch s dostatočným množstvom chladiva na udržanie teploty približne -78 °C počas celej prepravy. Po prijatí ihneď skontrolujte obal a bezodkladne premiestnite injekčné liekovky do vhodného skladu.

08Darca

Vek darcu
30 rokov
Etnická príslušnosť
Afroameričan