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HK-CRISPR-mEGFP-Nup214
Tessuto
Endocervice
Malattia
Adenocarcinoma

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HK-CRISPR-mEGFP-Nup214

Cell line · Codice prodotto 300671

The HK-CRISPR-mEGFP-Nup214 cell line is designed to study Nup214, a key nuclear pore complex (NPC) component. Using CRISPR-Cas9, this cell line adds a mon...

€800.00IVA e spese di spedizione escluse

Personalizzazione / Suggerimenti

Disponibile
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01Informazioni generali

Descrizione

La linea cellulare HK-CRISPR-mEGFP-Nup214 è stata progettata per studiare Nup214, un componente chiave del complesso del poro nucleare (NPC). Utilizzando CRISPR-Cas9, questa linea cellulare aggiunge un tag di proteina verde fluorescente monomerica potenziata (mEGFP) a Nup214, consentendo la visualizzazione in tempo reale del suo ruolo nel trasporto nucleocitoplasmatico e nella regolazione del ciclo cellulare.

Questa linea cellulare garantisce effetti off-target minimi e consente tecniche di imaging avanzate per studiare la struttura e la funzione delle NPC. È preziosa per studiare il trasporto nucleocitoplasmatico e le malattie correlate, come alcune leucemie, ed è utile per lo screening di composti che influenzano la funzione della NPC.

Tessuto
Endocervice
Malattia
Adenocarcinoma

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Donna
Proprietà di crescita
Aderente
Presenza di OGM
GMO-S1
Dettagli sullo stato degli OGM
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains a CRISPR-engineered mEGFP fusion at the Nup214 locus for studying nucleocytoplasmic transport. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Cellule simili a quelle epiteliali con forma di pietra a mosaico

04Identificatori

Riferimento bibliografico
HK-CRISPR-mEGFP-Nup214 (numero di catalogo Cytion 300671)
Codice fiscale NCBI
9606
Depositario
Il laboratorio Ellenberg (EMBL)

05Espressione e suscettibilità

Espressione proteica
Nup214, tag mEGFP

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
DMEM, w: 4,5 g/L di glucosio, w: 4 mM di L-Glutammina, w: 3,7 g/L di NaHCO3, w: 1,0 mM di piruvato di sodio (articolo Cytion numero 820300a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Scongelamento e coltura

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Età dei donatori
30 anni
Etnia
Afroamericano