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HK-CRISPR-mEGFP-Nup214
Tecido
Endocérvix
Doença
Adenocarcinoma

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HK-CRISPR-mEGFP-Nup214

Cell line · Número do produto 300671

The HK-CRISPR-mEGFP-Nup214 cell line is designed to study Nup214, a key nuclear pore complex (NPC) component. Using CRISPR-Cas9, this cell line adds a mon...

€800.00sem impostos nem portes de envio

Personalização / Recomendações

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1

01Informações gerais

Descrição

A linha celular HK-CRISPR-mEGFP-Nup214 foi concebida para estudar a Nup214, um componente chave do complexo de poros nucleares (NPC). Utilizando CRISPR-Cas9, esta linha celular adiciona uma etiqueta de proteína verde fluorescente monomérica melhorada (mEGFP) à Nup214, permitindo a visualização em tempo real do seu papel no transporte nucleocitoplasmático e na regulação do ciclo celular.

Esta linha celular garante efeitos mínimos fora do alvo e permite técnicas avançadas de imagiologia para estudar a estrutura e função do NPC. É valiosa para a investigação do transporte nucleocitoplasmático e de doenças relacionadas, como certas leucemias, e é útil para o rastreio de compostos que afectam a função da NPC.

Tecido
Endocérvix
Doença
Adenocarcinoma

02Classificação

Organismo
Humano
Sexo
Feminino
Propriedades de crescimento
Aderente
Estatuto em matéria de OGM
GMO-S1
Detalhes sobre o estatuto dos OGM
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains a CRISPR-engineered mEGFP fusion at the Nup214 locus for studying nucleocytoplasmic transport. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Nível de biossegurança
1

03Características

Morfologia
Células de tipo epitelial com forma de pedra em mosaico

04Identificadores

Referência
HK-CRISPR-mEGFP-Nup214 (número de catálogo 300671 da Cytion)
Número de identificação fiscal do NCBI
9606
Depositante
O Laboratório Ellenberg (EMBL)

05Expressão e suscetibilidade

Expressão proteica
Nup214, etiqueta mEGFP

06Manuseamento e cultura

Meio de cultura
DMEM, com: 4,5 g/L de glucose, com: 4 mM de L-Glutamina, com: 3,7 g/L de NaHCO3, com: 1,0 mM de piruvato de sódio (número de artigo Cytion 820300a)
Atmosfera de incubação

37°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Suplementos
Completar o meio com 10% de FBS
Reagente de dissociação
Accutase
Subcultura
Retirar o meio antigo das células aderentes e lavá-las com PBS sem cálcio e magnésio. Nos frascos T25, utilizar 3-5 ml de PBS e nos frascos T75, 5-10 ml. Em seguida, cobrir completamente as células com Accutase, utilizando 1-2 ml para os frascos T25 e 2,5 ml para os frascos T75. Deixar as células incubar à temperatura ambiente durante 8-10 minutos para as destacar. Após a incubação, misturar suavemente as células com 10 ml de meio para as ressuspender e, em seguida, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Deitar fora o sobrenadante, ressuspender as células em meio fresco e transferi-las para novos frascos que já contenham meio fresco.
Descongelamento e cultura

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controlo de qualidade e criopreservação

Esterilidade

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos um meio de crescimento completo (incluindo FBS) + 10% DMSO para uma viabilidade pós-descongelamento adequada, ou CM-1 (número de catálogo Cytion 800100), que inclui osmoprotectores optimizados e estabilizadores metabólicos para melhorar a recuperação e reduzir o stress induzido pela crio.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

08Doador

Idade do dador
30 anos
Etnia
Afro-americano