พื้นฐานการเพาะเลี้ยงเซลล์

เซลล์ต้นกำเนิดกับเซลล์สายพันธุ์อมตะ

เซลล์ปฐมภูมิถูกแยกออกจากเนื้อเยื่อโดยตรงและนำมาเพาะเลี้ยงเป็นครั้งแรก เนื่องจากเซลล์เหล่านี้ยังคงใกล้เคียงกับเนื้อเยื่อต้นกำเนิดมากกว่า จึงมักแสดงพฤติกรรมของเซลล์ตามธรรมชาติได้อย่างแม่นยำมากกว่าแบบจำลองในห้องปฏิบัติการที่พัฒนาขึ้นเป็นเวลานาน ด้วยเหตุนี้ เซลล์ปฐมภูมิจึงมีคุณค่าอย่างยิ่งเมื่อความเกี่ยวข้องทางสรีรวิทยาเป็นสิ่งสำคัญ ในขณะเดียวกัน พวกมันมักจะมีความไวต่อสิ่งกระตุ้นมากขึ้น อาจเจริญเติบโตช้ากว่า และโดยทั่วไปแล้วจะมีข้อกำหนดในการเพาะเลี้ยงที่เข้มงวดกว่าเซลล์ไลน์ที่ตั้งตัวแล้ว

เซลล์ไลน์ที่คงสภาพอมตะ ในทางตรงกันข้าม ได้พัฒนาความสามารถในการเพิ่มจำนวนเกินกว่าอายุขัยปกติของเซลล์ต้นกำเนิด กระบวนการนี้อาจเกิดขึ้นเองโดยธรรมชาติหรือถูกนำมาใช้โดยเจตนาผ่านการเปลี่ยนแปลงสภาพหรือการดัดแปลงพันธุกรรม เซลล์ไลน์ที่คงสภาพอยู่ได้เป็นอมตะถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายเนื่องจากโดยทั่วไปแล้วสามารถดูแลรักษาได้ง่ายกว่า มีแหล่งที่มากและพร้อมใช้งานมากกว่า และเหมาะสมสำหรับการทดลองในเชิงปฏิบัติการและในขนาดใหญ่ เซลล์เหล่านี้มักมีความแข็งแรง สามารถทำซ้ำได้ และมีลักษณะเฉพาะที่ชัดเจน

อย่างไรก็ตาม ความสะดวกสบายนี้มาพร้อมกับการแลกเปลี่ยน เซลล์ที่ถูกทำให้เป็นอมตะอาจแตกต่างจากเนื้อเยื่อต้นฉบับในแง่ของรูปร่าง การแสดงออกของยีน การเผาผลาญ และการตอบสนองต่อสิ่งกระตุ้น ส่งผลให้เซลล์เหล่านี้อาจไม่สะท้อนสถานการณ์ทางชีวภาพในร่างกายจริงได้ใกล้เคียงกับเซลล์ต้นกำเนิดเสมอไป การเลือกใช้เซลล์ปฐมภูมิหรือเซลล์ไลน์ที่คงสภาพนิรันดร์จึงขึ้นอยู่กับวัตถุประสงค์ของการทดลอง ระดับความเกี่ยวข้องทางสรีรวิทยาที่ต้องการ และข้อกำหนดในทางปฏิบัติของกระบวนการทำงาน

เซลล์ไลน์แบบจำกัดกับเซลล์ไลน์แบบต่อเนื่อง

คำว่า "จำกัด" และ "ต่อเนื่อง" อธิบายถึงอายุการเพิ่มจำนวนของเซลล์ที่ถูกเพาะเลี้ยง สายพันธุ์เซลล์ที่มีอายุจำกัดสามารถแบ่งตัวได้เพียงจำนวนครั้งที่จำกัดก่อนที่จะเข้าสู่ภาวะเสื่อมและหยุดการเพิ่มจำนวน อายุขัยที่จำกัดนี้เป็นคุณสมบัติทางชีววิทยาปกติของเซลล์หลายชนิดที่ไม่ถูกเปลี่ยนแปลง และมักเกี่ยวข้องกับลักษณะทางสรีรวิทยาที่มากกว่า

ในทางตรงกันข้าม สายเซลล์ต่อเนื่องสามารถเพิ่มจำนวนได้อย่างไม่จำกัดภายใต้สภาวะการเพาะเลี้ยงที่เหมาะสม สายเซลล์เหล่านี้มักถูกทำให้เป็นอมตะและจึงมีประโยชน์อย่างมากสำหรับการทดลองระยะยาว งานห้องปฏิบัติการประจำ และการประยุกต์ใช้ที่ต้องการแหล่งเซลล์ที่เสถียรและพร้อมใช้งาน การมีอายุการใช้งานที่ยาวนานทำให้สะดวก แต่ในขณะเดียวกันก็หมายความว่าอาจมีการสะสมของการเปลี่ยนแปลงทางพันธุกรรมหรือลักษณะทางฟีโนไทป์เมื่อเวลาผ่านไป

แม้ว่าความแตกต่างทั้งสองจะมีความเกี่ยวข้องกันอย่างใกล้ชิด แต่ก็ไม่ได้เหมือนกันอย่างสมบูรณ์ระหว่างคำว่า "ปฐมภูมิ" กับ "อมตะ" คำว่า "ปฐมภูมิ" และ "อมตะ" อธิบายถึงแหล่งกำเนิดหรือสถานะทางชีวภาพของวัฒนธรรมนั้น ๆ ขณะที่คำว่า "จำกัด" และ "ต่อเนื่อง" หมายถึงศักยภาพในการเจริญเติบโตของวัฒนธรรมนั้น ๆ ตามกาลเวลา การเข้าใจความแตกต่างนี้ช่วยให้สามารถเลือกแบบจำลองระบบได้เหมาะสม และช่วยในการตีความผลการทดลองได้ถูกต้อง

คำศัพท์ที่ใช้ร่วมกัน

การเพาะเลี้ยงเซลล์อาศัยคำศัพท์พื้นฐานหลายคำที่ใช้ในโปรโตคอล สิ่งพิมพ์ และงานในห้องปฏิบัติการประจำวัน การเข้าใจคำศัพท์เหล่านี้เป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการอ่านคำแนะนำการทดลองอย่างถูกต้อง การบันทึกขั้นตอนการทำงาน และการประเมินสภาพของการเพาะเลี้ยง

ความกลมกลืน

ความหนาแน่นของเซลล์ (Confluency) หมายถึงปริมาณของพื้นผิวที่สามารถเจริญเติบโตได้ที่ถูกปกคลุมโดยเซลล์ ซึ่งใช้สำหรับวัฒนธรรมเซลล์ที่เกาะติดกับพื้นผิว เช่น การเพาะเลี้ยงเซลล์ในขวดเพาะเลี้ยง, จานเพาะเลี้ยง, หรือแผ่นเพาะเลี้ยง วัฒนธรรมที่ความหนาแน่น 50% ครอบคลุมประมาณครึ่งหนึ่งของพื้นที่ผิว, ในขณะที่วัฒนธรรมที่ความหนาแน่น 100% จะก่อตัวเป็นชั้นเซลล์ที่สมบูรณ์

พารามิเตอร์นี้มีความสำคัญเนื่องจากช่วยในการกำหนดเวลาที่เหมาะสมสำหรับการย้ายผ่าน การรักษา หรือการวิเคราะห์ หากเซลล์ที่เกาะติดกันแน่นเกินไป พฤติกรรมการเจริญเติบโต รูปร่าง และกระบวนการเผาผลาญของเซลล์อาจเปลี่ยนแปลงได้ ด้วยเหตุนี้ การติดตามความหนาแน่นของเซลล์จึงเป็นส่วนหนึ่งของการดูแลรักษาวัฒนธรรมเซลล์ให้แข็งแรง ในวัฒนธรรมแบบแขวนลอย ความหนาแน่นของเซลล์มักให้ข้อมูลที่มีประโยชน์มากกว่าความหนาแน่นของเซลล์

หมายเลขทางเดิน

หมายเลขการผ่านบ่งบอกถึงจำนวนครั้งที่วัฒนธรรมถูกแบ่งย่อยตั้งแต่เริ่มก่อตั้ง, ได้รับ, หรือละลาย ขึ้นอยู่กับระบบการนับที่ใช้ ทุกครั้งที่เซลล์ถูกแบ่งไปยังภาชนะใหม่ หมายเลขการผ่านจะเพิ่มขึ้น

การติดตามหมายเลขการเพาะเลี้ยงมีความสำคัญเนื่องจากเซลล์สามารถเปลี่ยนแปลงได้เมื่อเวลาผ่านไปในการเพาะเลี้ยง เมื่อมีการเพาะเลี้ยงเพิ่มขึ้น เซลล์บางชนิดอาจแสดงลักษณะการเจริญเติบโต รูปร่าง การแสดงออกของยีน หรือปฏิกิริยาในการทดลองที่เปลี่ยนแปลงไป การบันทึกข้อมูลอย่างสม่ำเสมอจึงช่วยปรับปรุงความสามารถในการทำซ้ำได้ และทำให้ง่ายต่อการเปรียบเทียบผลลัพธ์ระหว่างการทดลองและระหว่างห้องปฏิบัติการ

เวลาสองเท่า

เวลาสองเท่าหมายถึงเวลาเฉลี่ยที่ประชากรเซลล์ต้องการเพื่อเพิ่มจำนวนเป็นสองเท่าภายใต้เงื่อนไขการเพาะเลี้ยงที่กำหนดไว้ เป็นหนึ่งในตัวบ่งชี้ที่มีประโยชน์มากที่สุดเกี่ยวกับพฤติกรรมการเจริญเติบโต และสามารถเปลี่ยนแปลงได้มากระหว่างชนิดของเซลล์และสายพันธุ์ของเซลล์ที่แตกต่างกัน

เวลาการเพิ่มจำนวนเป็นสองเท่าที่คงที่มักบ่งชี้ว่าวัฒนธรรมอยู่ในสภาพที่ดีและกำลังเจริญเติบโตภายใต้เงื่อนไขที่เหมาะสม หากเวลาการเพิ่มจำนวนเป็นสองเท่าเปลี่ยนแปลงอย่างไม่คาดคิด อาจบ่งชี้ถึงความเครียด สภาพวัฒนธรรมไม่เหมาะสม การปนเปื้อน หรือพฤติกรรมของเซลล์ที่เปลี่ยนแปลงไป เนื่องจากเวลาการเพิ่มจำนวนเป็นสองเท่าขึ้นอยู่กับองค์ประกอบของอาหารเลี้ยงเชื้อ อุณหภูมิ ความหนาแน่นของการเพาะปลูก และปัจจัยอื่น ๆ อย่างมาก จึงควรตีความเวลาการเพิ่มจำนวนเป็นสองเท่าในบริบทเสมอ

ความเป็นไปได้

ความสามารถในการดำรงชีวิต (Viability) หมายถึงสัดส่วนของเซลล์ที่มีชีวิตในประชากรหนึ่ง ๆ โดยทั่วไปจะประเมินหลังจากละลายน้ำแข็ง ระหว่างการเพาะเลี้ยงตามปกติ ก่อนเริ่มการทดลองเพาะเลี้ยง หรือหลังการสัมผัสกับสารหรือกระบวนการใด ๆ ความสามารถในการดำรงชีวิตที่สูงมักบ่งชี้ว่าเซลล์อยู่ในสภาพดีและเหมาะสมสำหรับการนำไปใช้ในงานต่อไป

การลดลงของความสามารถในการดำรงชีวิตสามารถเกิดขึ้นได้จากหลายปัจจัย รวมถึงความเครียดทางกล สภาพการเพาะเลี้ยงที่ไม่เหมาะสม สารพิษ หรือการปนเปื้อน ความสามารถในการดำรงชีวิตมักถูกวัดร่วมกับจำนวนเซลล์ทั้งหมดเพื่อให้ได้ภาพรวมที่สมบูรณ์ยิ่งขึ้นของคุณภาพการเพาะเลี้ยง ในทางปฏิบัติ มันเป็นหนึ่งในพารามิเตอร์หลักที่ใช้ในการตัดสินใจว่าการเพาะเลี้ยงควรดำเนินต่อไป ปรับปรุง หรือทิ้ง

สัณฐานวิทยา

สัณฐานวิทยาหมายถึงลักษณะที่มองเห็นได้ของเซลล์ภายใต้กล้องจุลทรรศน์ ซึ่งรวมถึงรูปร่าง ขนาด การจัดเรียง และพฤติกรรมการยึดติด เซลล์หลายชนิดมีลักษณะสัณฐานวิทยาเฉพาะเมื่ออยู่ในสภาพสมบูรณ์ และผู้ใช้ที่มีประสบการณ์มักจะสามารถสังเกตเห็นปัญหาได้จากการเปลี่ยนแปลงของลักษณะเซลล์ก่อน

การเปลี่ยนแปลงรูปร่างสามารถบ่งชี้ถึงความเครียด, การเปลี่ยนแปลง, การเสื่อมสภาพ, การปนเปื้อน, หรือสภาพการเพาะเลี้ยงที่ไม่เหมาะสมได้ ตัวอย่างเช่น เซลล์อาจกลายเป็นกลมผิดปกติ, ขยายใหญ่, เป็นเม็ด, หลุดออกจากกัน, หรือมีรูปร่างไม่สม่ำเสมอ การสังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์อย่างสม่ำเสมอจึงเป็นส่วนสำคัญของการทำงานเพาะเลี้ยงเซลล์ตามปกติ และให้ข้อมูลที่มีคุณค่ามากกว่าการนับจำนวนเซลล์เพียงอย่างเดียว

ข้อกำหนดพื้นฐานสำหรับการเจริญเติบโต

เพื่อความอยู่รอดและการเพิ่มจำนวนในหลอดทดลอง เซลล์ต้องการสภาพแวดล้อมที่มั่นคงและเอื้อต่อการเจริญเติบโต แม้แต่ความแตกต่างเพียงเล็กน้อยในสภาวะการเพาะเลี้ยงก็สามารถส่งผลต่ออัตราการเจริญเติบโต การเผาผลาญ รูปร่าง และความสามารถในการทำซ้ำของการทดลองได้ ปัจจัยที่สำคัญที่สุดได้แก่ อุณหภูมิ คาร์บอนไดออกไซด์ ความชื้น ค่าพีเอช องค์ประกอบของอาหารเลี้ยงเซลล์ และการเติมสารเสริม

อุณหภูมิ

อุณหภูมิเป็นหนึ่งในพารามิเตอร์พื้นฐานที่สำคัญที่สุดในการเพาะเลี้ยงเซลล์ เนื่องจากมีผลต่อกิจกรรมของเอนไซม์ การเผาผลาญพลังงาน การทำงานของเยื่อหุ้มเซลล์ และสรีรวิทยาของเซลล์โดยรวม เซลล์ของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมส่วนใหญ่จะถูกเพาะเลี้ยงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส ซึ่งใกล้เคียงกับอุณหภูมิร่างกายปกติ อย่างไรก็ตาม ไม่ใช่ทุกชนิดของเซลล์ที่ต้องการสภาวะเดียวกัน และอุณหภูมิที่แนะนำอาจแตกต่างกันไปตามชนิดของเซลล์และการนำไปใช้

การเปลี่ยนแปลงของอุณหภูมิสามารถทำให้เซลล์เกิดความเครียดและมีผลต่อการยึดเกาะ การเจริญเติบโต และการฟื้นตัวหลังการจัดการ ด้วยเหตุนี้ ควรเก็บวัฒนธรรมเซลล์ไว้นอกตู้เพาะเลี้ยงเฉพาะเมื่อจำเป็นเท่านั้น และควรตรวจสอบประสิทธิภาพของตู้เพาะเลี้ยงอย่างสม่ำเสมอ การรักษาอุณหภูมิให้คงที่เป็นสิ่งสำคัญทั้งต่อสุขภาพของเซลล์และความสม่ำเสมอของการทดลอง

คาร์บอนไดออกไซด์

ในระบบวัฒนธรรมของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมหลายชนิด CO₂ มีบทบาทสำคัญในการรักษาค่า pH ที่ถูกต้องของตัวกลาง นี่เป็นเพราะตัวกลางหลายชนิดใช้ระบบบัฟเฟอร์ที่มีส่วนผสมของไบคาร์บอเนตซึ่งออกแบบมาเพื่อทำงานในสมดุลกับปริมาณ CO₂ ที่กำหนดไว้ การตั้งค่า CO₂ ที่ 5% เป็นเรื่องปกติ อย่างไรก็ตาม บางสูตรของตัวกลางหรือเซลล์ชนิดเฉพาะอาจต้องการเงื่อนไขที่แตกต่างกัน

หากระดับ CO₂ ไม่สอดคล้องกับระบบบัฟเฟอร์ของสารอาหาร pH อาจเปลี่ยนแปลงและส่งผลกระทบเชิงลบต่อการเจริญเติบโตและการทำงานของเซลล์ได้ นี่คือเหตุผลว่าทำไมการตั้งค่าตู้เพาะเชื้อและส่วนประกอบของสารอาหารจึงควรได้รับการพิจารณาควบคู่กันเสมอ ในทางปฏิบัติ การควบคุม CO₂ อย่างถูกต้องเป็นข้อกำหนดพื้นฐานสำหรับการรักษาสภาพแวดล้อมการเพาะเลี้ยงให้คงที่

ความชื้น

ความชื้นสูงในตู้ฟักช่วยป้องกันการระเหยจากภาชนะเพาะเลี้ยง ซึ่งมีความสำคัญอย่างยิ่งเนื่องจากการระเหยจะเปลี่ยนแปลงความเข้มข้นของเกลือ สารอาหาร และส่วนประกอบที่ละลายอื่น ๆ ในอาหารเลี้ยงเชื้อ ส่งผลให้ความเข้มข้นของออสโมซิสเพิ่มขึ้น ซึ่งอาจส่งผลเสียต่อสุขภาพของเซลล์และผลลัพธ์ของการทดลอง

ดังนั้น เครื่องอบเพาะเลี้ยงเซลล์จึงมักถูกใช้งานในสภาวะที่มีความชื้นสูง โดยมักใช้ถังเก็บน้ำเพื่อช่วยในการควบคุมความชื้น การรักษาสภาพแวดล้อมนี้ให้คงที่กลายเป็นสิ่งสำคัญอย่างยิ่งเมื่อทำงานกับปริมาณการเพาะเลี้ยงที่น้อย เนื่องจากมีความไวต่อการระเหยมากขึ้น การควบคุมความชื้นที่ดีช่วยส่งเสริมให้สภาวะการเพาะเลี้ยงมีความเสถียรและสามารถทำซ้ำได้ตลอดเวลา

พีเอช

ค่า pH ของสภาพแวดล้อมในการเพาะเลี้ยงมีผลโดยตรงต่อกระบวนการระดับเซลล์หลายอย่าง รวมถึงกิจกรรมของเอนไซม์ การลำเลียงผ่านเยื่อหุ้มเซลล์ และการทำงานของระบบเมตาบอลิซึม เซลล์ของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมส่วนใหญ่เจริญเติบโตได้ดีที่สุดในช่วงค่า pH ที่ค่อนข้างแคบ โดยทั่วไปอยู่ที่ประมาณ 7.2 ถึง 7.4 แม้แต่การเปลี่ยนแปลงเพียงเล็กน้อยก็สามารถส่งผลต่อการเจริญเติบโต รูปร่าง และความสามารถในการอยู่รอดของเซลล์ได้

การเปลี่ยนแปลงของค่า pH อาจเกิดจากการเปลี่ยนแปลงของระดับ CO₂, การเผาผลาญของเซลล์, องค์ประกอบของอาหารเลี้ยงเชื้อ, หรือการสัมผัสกับอากาศในห้องเป็นเวลานาน อาหารเลี้ยงเชื้อหลายชนิดมีฟีนอลแดงเป็นสารบ่งชี้ค่า pH แบบมองเห็น ดังนั้นการเปลี่ยนแปลงของค่า pH มักจะตามมาด้วยการเปลี่ยนแปลงของสีที่สังเกตได้ การตรวจสอบค่า pH จึงเป็นส่วนสำคัญในการประเมินความเสถียรของการเพาะเลี้ยง

สื่อ

อาหารเลี้ยงเชื้อให้สารอาหารและสภาพแวดล้อมทางเคมีที่เซลล์ต้องการเพื่อความอยู่รอดและการเจริญเติบโต ขึ้นอยู่กับสูตรอาหาร อาจประกอบด้วยเกลือ กรดอะมิโน วิตามิน กลูโคส สารบัฟเฟอร์ และสารจำเป็นอื่นๆ เซลล์แต่ละชนิดมักต้องการอาหารเลี้ยงเชื้อที่แตกต่างกัน และการเลือกอาหารเลี้ยงเชื้อสามารถส่งผลอย่างมากต่อพฤติกรรมของเซลล์และประสิทธิภาพของการทดลอง

สื่อที่ใช้กันทั่วไปประกอบด้วยสูตรต่างๆ เช่น DMEM, RPMI 1640, EMEM และ Ham's F-12 เป็นต้น ในทางปฏิบัติ สื่อมักถูกเสริมด้วยซีรัม ปัจจัยการเจริญเติบโต หรือส่วนประกอบเพิ่มเติมอื่นๆ ขึ้นอยู่กับความต้องการของเซลล์ การเลือกสื่อที่เหมาะสมจึงเป็นส่วนสำคัญในการสร้างสภาวะการเพาะเลี้ยงที่เชื่อถือได้

ซีรั่ม

ซีรัมเป็นสารเสริมที่ใช้กันทั่วไปในอาหารเลี้ยงเซลล์และให้ส่วนผสมที่ซับซ้อนของปัจจัยการเจริญเติบโต ฮอร์โมน ไขมัน โปรตีนพาหะ และส่วนประกอบที่ช่วยในการยึดเกาะ เซรั่มจากเลือดของลูกวัวในครรภ์ (Fetal bovine serum) ซึ่งมักย่อว่า FBS ถูกใช้อย่างแพร่หลายเนื่องจากช่วยสนับสนุนการเจริญเติบโตของเซลล์หลายประเภทและสามารถทำให้สภาวะการเพาะเลี้ยงมีความแข็งแรงมากขึ้น

ในขณะเดียวกัน ซีรั่มก็สร้างความแปรปรวนเนื่องจากองค์ประกอบที่แน่นอนอาจแตกต่างกันในแต่ละชุดการผลิต ซึ่งอาจส่งผลต่อความสามารถในการทำซ้ำได้ โดยเฉพาะอย่างยิ่งในการทดสอบที่มีความไวสูง ด้วยเหตุนี้ บางแอปพลิเคชันจึงใช้สื่อที่มีเซรั่มลดลง, เซรั่มฟรี, หรือสื่อที่กำหนดทางเคมีแทน ทั้งนี้การต้องการเซรั่มขึ้นอยู่กับชนิดของเซลล์, วัตถุประสงค์ของการทดลอง, และระดับของการมาตรฐานที่ต้องการ

การเพาะเลี้ยงแบบติดผนังกับแบบแขวนลอย

หนึ่งในความแตกต่างที่สำคัญที่สุดในการเพาะเลี้ยงเซลล์คือการที่เซลล์ถูกเลี้ยงให้เป็นเซลล์ติดผนังหรือเซลล์แขวนลอย เซลล์ติดผนังต้องการพื้นผิวสำหรับการยึดเกาะและการเจริญเติบโต ในขณะที่เซลล์แขวนลอยจะกระจายตัวอย่างอิสระในอาหารเลี้ยงเชื้อ ความแตกต่างนี้มีผลกระทบต่อเกือบทุกส่วนของกระบวนการทำงาน รวมถึงการเลือกภาชนะ การตรวจสอบ การผ่านรุ่น และการเก็บเกี่ยว

การเพาะเลี้ยงแบบเกาะติดพบได้บ่อยในเซลล์ที่มาจากเนื้อเยื่อแข็ง เช่น เซลล์เยื่อบุผิวหลายชนิด ไฟโบรบลาสต์ และเซลล์ชนิดอื่น ๆ ที่ต้องยึดเกาะพื้นผิว การเพาะเลี้ยงเหล่านี้มักตรวจสอบโดยการสังเกตรูปร่างและระดับการเกาะติดกันของเซลล์ และโดยทั่วไปจะต้องมีการแยกเซลล์ออกจากพื้นผิวก่อนที่จะนำไปเพาะเลี้ยงใหม่ ในทางตรงกันข้าม การเพาะเลี้ยงแบบแขวนลอย (Suspension culture) เป็นวิธีที่พบได้บ่อยสำหรับเซลล์ที่ได้จากเลือดและเซลล์ชนิดอื่น ๆ ที่ไม่เกาะติดพื้นผิว การเพาะเลี้ยงเหล่านี้มักประเมินจากความหนาแน่นของเซลล์ ความมีชีวิตของเซลล์ และระดับของการจับกลุ่มกันในอาหารเลี้ยงเชื้อ

ไม่มีรูปแบบใดที่ดีกว่าโดยธรรมชาติ แต่ละรูปแบบเหมาะสมกับคำถามทางชีววิทยาและการประยุกต์ใช้ทางเทคนิคที่แตกต่างกัน การเพาะเลี้ยงแบบติดผนังมักมีข้อได้เปรียบเมื่อรูปร่างของเซลล์ การยึดเกาะ หรือปฏิสัมพันธ์กับพื้นผิวมีความสำคัญ ในขณะที่การเพาะเลี้ยงแบบแขวนลอยมักง่ายต่อการปรับขนาดและจัดการในกระบวนการทำงานที่มีปริมาณมาก การเข้าใจว่ากำลังใช้รูปแบบการเพาะเลี้ยงแบบใดเป็นสิ่งสำคัญสำหรับการเลือกกลยุทธ์การจัดการที่ถูกต้องตั้งแต่เริ่มต้น