İçeriğe atla
HK-CRISPR-mEGFP-Seh1
Doku
Endoserviks
Hastalık
Adenokarsinom

HK-CRISPR-mEGFP-Seh1

Cell line · Ürün numarası 300669

The HK-CRISPR-mEGFP-Seh1 cell line is engineered for precise genomic editing using the CRISPR/Cas9 system, targeting the Seh1 gene. Seh1 is part of the nu...

€800.00vergi ve kargo hariç
Stokta mevcut
Lot
Önerilen (en taze parti)
  • CoA
1

01Genel bilgiler

Açıklama

HK-CRISPR-mEGFP-Seh1 hücre hattı, Seh1 genini hedefleyen CRISPR/Cas9 sistemi kullanılarak hassas genomik düzenleme için tasarlanmıştır. Seh1, nükleositoplazmik taşıma için çok önemli olan nükleer gözenek kompleksinin bir parçasıdır. Monomerik geliştirilmiş yeşil floresan proteinin (mEGFP) dahil edilmesi, Seh1'in görselleştirilmesine olanak tanıyarak hücresel lokalizasyonu ve işlevi üzerine çalışmalara yardımcı olur.

Bu hücre hattı, Seh1'in mitoz ve gen ifadesi gibi hücresel süreçlerdeki rolleri üzerine yapılan araştırmalar için değerlidir. MEGFP ile floresan etiketleme, canlı hücre görüntülemesini mümkün kılarak, bazı kanserler ve nörodejeneratif bozukluklar da dahil olmak üzere nükleer gözenek kompleksi işlev bozukluğuyla bağlantılı hastalıkların araştırılmasını kolaylaştırır. HK-CRISPR-mEGFP-Seh1 hücre hattı, kapsamlı biyomedikal araştırmalar için genetik modifikasyonu gelişmiş görüntüleme ile birleştirmektedir.

Doku
Endoserviks
Hastalık
Adenokarsinom

02Sınıflandırma

Canlı
İnsan
Cinsiyet
Kadın
Büyüme özellikleri
Bağlı
GDO durumu
GMO-S1
GDO durumuna ilişkin ayrıntılar
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains a CRISPR knock-in of mEGFP at the Seh1 locus, supporting live-cell analysis of Y-complex dynamics. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biyogüvenlik seviyesi
1

03Özellikler

Morfoloji
Mozaik taş şekilli epitel benzeri hücreler

04Tanımlayıcılar

Kaynak gösterimi
HK-CRISPR-mEGFP-Seh1 (Cytion katalog numarası 300669)
NCBI Vergi Kimlik Numarası
9606
Mevduat sahibi
Ellenberg Laboratuvarı (EMBL)

05İfade ve duyarlılık

Protein ekspresyonu
Seh1, mEGFP etiketi

06İşleme ve yetiştirme

Besiyeri
DMEM, w: 4,5 g/L Glukoz, w: 4 mM L-Glutamin, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM Sodyum piruvat (Cytion ürün numarası 820300a)
Kuluçka ortamı

37°C, %5CO2, nemlendirilmiş atmosfer.

Takviyeler
Ortamı %10 FBS ile takviye edin
Ayrıştırma reaktifi
Accutase
Alt kültür oluşturma
Yapışık hücrelerden eski ortamı çıkarın ve kalsiyum ve magnezyum içermeyen PBS ile yıkayın. T25 şişeleri için 3-5 ml PBS ve T75 şişeleri için 5-10 ml kullanın. Ardından, T25 flasklar için 1-2 ml ve T75 flasklar için 2,5 ml kullanarak hücreleri Accutase ile tamamen kaplayın. Hücreleri ayırmak için oda sıcaklığında 8-10 dakika inkübasyona bırakın. İnkübasyondan sonra, hücreleri yeniden süspanse etmek için 10 ml besiyeriyle hafifçe karıştırın, ardından 300xg'de 3 dakika santrifüjleyin. Süpernatantı atın, hücreleri taze besiyerinde yeniden süspanse edin ve zaten taze besiyeri içeren yeni şişelere aktarın.
Çözme ve kültürleme
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kalite kontrol ve kriyoprezervasyon

Kısırlık

Mikoplazma kontaminasyonu hem PCR tabanlı tahliller hem de lüminesans tabanlı mikoplazma tespit yöntemleri kullanılarak dışlanır.

Bakteriyel, fungal veya maya kontaminasyonu olmadığından emin olmak için hücre kültürleri günlük görsel incelemelere tabi tutulur.

Dondurma ortamı
Kriyoprezervasyon ortamı olarak, yeterli çözülme sonrası canlılık için tam büyüme ortamı (FBS dahil) + %10 DMSO veya iyileşmeyi artırmak ve kriyo-indüklenmiş stresi azaltmak için optimize edilmiş ozmoprotektanlar ve metabolik stabilizatörler içeren CM-1 (Cytion katalog numarası 800100) kullanıyoruz.
Saklama koşulları

Uzun süreli muhafaza için flakonları yaklaşık -150 ila -196 °C'de buhar fazlı sıvı nitrojen içine yerleştirin. 80 °C'de saklama yalnızca sıvı nitrojene aktarılmadan önce kısa bir ara adım olarak kabul edilebilir.

Nakliye koşulları

Kriyoprezerve edilmiş hücre hatları, nakliye boyunca yaklaşık -78 °C'yi korumak için yeterli soğutucu akışkan içeren, onaylanmış, yalıtılmış ambalajlarda kuru buz üzerinde gönderilir. Teslim aldığınızda, kabı hemen inceleyin ve flakonları gecikmeden uygun depoya aktarın.

08Bağışçı

Bağışçının yaşı
30 yıl
Etnik köken
Afro-Amerikan