الانتقال إلى المحتوى
HK-CRISPR-mEGFP-Seh1
الأنسجة
باطن عنق الرحم
المرض
السرطان الغدي

المستندات

HK-CRISPR-mEGFP-Seh1

Cell line · رقم المنتج 300669

The HK-CRISPR-mEGFP-Seh1 cell line is engineered for precise genomic editing using the CRISPR/Cas9 system, targeting the Seh1 gene. Seh1 is part of the nu...

€800.00باستثناء الضريبة وتكاليف الشحن
متوفر
لوت
موصى بها (أحدث دفعة)
  • CoA
1

01معلومات عامة

الوصف

تمت هندسة خط خلايا HK-CRISPR-mEGFP-Seh1 للتحرير الجيني الدقيق باستخدام نظام CRISPR/Cas9، مستهدفاً جين Seh1. ويُعد Seh1 جزءاً من مركب المسام النووي، وهو جزء من مركب المسام النووية، وهو أمر بالغ الأهمية للنقل النووي. يسمح إدراج بروتين الفلورسنت الأخضر المعزز الأحادي اللون (mEGFP) بتصور Seh1، مما يساعد في إجراء دراسات حول توطينه الخلوي ووظيفته.

ويُعد هذا الخط الخلوي ذا قيمة للأبحاث حول أدوار Seh1 في العمليات الخلوية مثل الانقسام الفتيلي والتعبير الجيني. ويتيح الوسم الفلوري مع mEGFP تصوير الخلايا الحية، مما يسهل إجراء تحقيقات في الأمراض المرتبطة بخلل وظائف مجمع المسام النووية، بما في ذلك بعض أنواع السرطان والاضطرابات العصبية التنكسية. ويجمع خط الخلايا HK-CRISPR-mEGFP-Seh1 بين التعديل الوراثي والتصوير المتقدم لإجراء أبحاث طبية حيوية شاملة.

الأنسجة
باطن عنق الرحم
المرض
السرطان الغدي

02التصنيف

كائن حي
إنسان
الجنس
أنثى
خصائص النمو
الملتزم
حالة الكائنات المعدلة وراثيًا
GMO-S1
تفاصيل حالة الكائنات المعدلة وراثيًا
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains a CRISPR knock-in of mEGFP at the Seh1 locus, supporting live-cell analysis of Y-complex dynamics. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
مستوى السلامة البيولوجية
1

03الخصائص

المورفولوجيا
خلايا تشبه الخلايا الظهارية ذات الشكل الحجري الفسيفسائي

04المعرّفات

المرجع
HK-CRISPR-mEGFP-Seh1 (كتالوج سيتيون رقم 300669)
رقم التعريف الضريبي لدى NCBI
9606
المودع
مختبر إلينبرغ (EMBL)

05التعبير والقابلية للإصابة

التعبير البروتيني
Seh1، mEGFP-tag

06التعامل مع النباتات وزراعتها

وسط الاستزراع
DMEM، ث: 4.5 جم/لتر جلوكوز، ث: 4 مليمتر جلوتامين، ث: 3.7 جم/لتر NaHCO3، ث: 1.0 مليمتر بيروفات الصوديوم (رقم المادة 820300a من سايتيون)
بيئة الحضانة

37 درجة مئوية، و5% من ثاني أكسيد الكربون في جو مرطب.

المكملات الغذائية
قم بتزويد الوسط ب 10٪ من ال FBS
كاشف التفكك
أكوتاس
إعادة الاستنبات
قم بإزالة الوسط القديم من الخلايا الملتصقة واغسلها باستخدام PBS الذي يفتقر إلى الكالسيوم والمغنيسيوم. بالنسبة لقوارير T25، استخدم 3-5 مل من PBS، وبالنسبة لقوارير T75، استخدم 5-10 مل. ثم، قم بتغطية الخلايا بالكامل باستخدام أكوتاز، باستخدام 1-2 مل لقوارير T25 و2.5 مل لقوارير T75. دع الخلايا تحتضن في درجة حرارة الغرفة لمدة 8-10 دقائق لفصلها. بعد الحضانة، اخلط الخلايا برفق مع 10 مل من الوسط لإعادة ترسيبها، ثم اطردها مركزيًا بسرعة 300xg لمدة 3 دقائق. تخلص من المادة الطافية، وأعد غمر الخلايا في وسط جديد وانقلها إلى قوارير جديدة تحتوي بالفعل على وسط جديد.
إذابة الثلج والزراعة
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07مراقبة الجودة والحفظ بالتبريد

العقم

يُستبعد التلوث بالميكوبلازما باستخدام كل من المقايسات القائمة على تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وطرق الكشف عن الميكوبلازما القائمة على التألق.

ولضمان عدم وجود تلوث بكتيري أو فطري أو خميرة يتم إخضاع مزارع الخلايا للفحص البصري اليومي.

وسط التجميد
كوسيط للحفظ بالتبريد، نستخدم وسط نمو كامل (بما في ذلك FBS) + 10% DMSO من أجل الحفاظ على حيوية كافية بعد ذوبان الجليد أو CM-1 (كتالوج Cytion رقم 800100)، والذي يتضمن مواد حماية أسموزموبيروتيكتية ومثبتات أيضية مُحسّنة لتعزيز التعافي وتقليل الإجهاد الناجم عن التبريد.
شروط التخزين

للحفظ طويل الأمد، ضع القوارير في نيتروجين سائل في طور البخار عند درجة حرارة تتراوح بين -150 و -196 درجة مئوية تقريباً. يُقبل التخزين عند درجة حرارة -80 درجة مئوية فقط كخطوة مؤقتة قصيرة قبل النقل إلى النيتروجين السائل.

شروط الشحن

تُشحن خطوط الخلايا المحفوظة بالتبريد على ثلج جاف في عبوات معزولة وموثوقة مع مبرد كافٍ للحفاظ على درجة حرارة -78 درجة مئوية تقريبًا طوال فترة النقل. عند الاستلام، افحص الحاوية على الفور وانقل القوارير دون تأخير إلى المخزن المناسب.

08المانح

عمر المتبرع
30 سنة
الأصل العرقي
أمريكي من أصل أفريقي