תאי AGS – מחקר על תאי אדנוקרצינומה בקיבה (AGS) במחקרי סרטן

תאי AGS מהווים קו תאים של אדנוקרצינומה בקיבה אנושית הנמצא בשימוש נרחב במחקר ביו-רפואי. הם משמשים בעיקר לחקר הביולוגיה של סרטן הקיבה, כולל צמיחת הגידול, התפתחותו, התקדמותו והתערבויות טיפוליות. בנוסף, הם משמשים לחקר האינטראקציות בין הפונדקאי לפתוגן.

 

מאפיינים כלליים ומקור תאי AGS

חשוב להכיר את מקור קו התאים ואת המאפיינים הכלליים שלו לפני שמתחילים לעבוד איתו. סעיף זה יסקור את הנושאים הבאים: מהן תאי AGS? מהו מקור תאי AGS? מהו המורפולוגיה של קו תאי הסרטן AGS?

• קו התאים AGS נגזר מרקמת הקיבה של אישה לבנה בת 54 עם אדנוקרצינומה בקיבה. הוא בודד בשנת 1979 [1].
• לתאי AGS יש מורפולוגיה דמוית אפיתל.
• תאי AGS האפיתליאליים בקיבה הם היפרדיפלואידים. מספר הכרומוזומים המודאלי לתאי AGS הוא 49, המופיע בכמעט 60% מהתאים. פוליפלואידיות מופיעה גם בכ-3.6% מהתאים.

קרצינומה של הקיבה בחתך רוחב תחת המיקרוסקופ.

מידע על גידול קו התאים AGS

לצורך טיפול וניהול נכונים של קו תאים, עליכם להכיר את מושגי היסוד של התרבית. בפרט, עליכם ללמוד: מהו זמן הכפלת התאים של AGS? מהו מצע התרבית של תאי AGS? כיצד מבצעים תרבית משנה של תאי AGS? אילו מצעי הקפאה משמשים לתאי AGS של אפיתל קיבה?

נקודות מרכזיות בגידול תאי AGS

זמן הכפלה:

זמן הכפלת תאי AGS נע בין 24 ל-48 שעות.

דבקות או בתמיסה:

תאי AGS הם תאים דבקים. הם צומחים לשכבה חד-תאית.

צפיפות זריעה:

תאי AGS נזרעים בצפיפות של 1 x 10⁴ תאים/סמ"^ר. בצפיפות זו, התאים יוצרים שכבה חד-תאית רצופה תוך 3 עד 5 ימים. לאחר הסרת התווך הישן, התאים נשטפים ב-1 x PBS ומוחזקים באינקובטור עם תמיסת פירוק Accutase. התאים המנותקים הושעו מחדש במדיום תרבית ונצנטריפו. משקע התאים הושעה שוב, ולאחר ספירת תאי AGS, הם מועברים לצלחת חדשה לצורך גידול.

מדיום גידול:

לגידול תאי AGS משתמשים במדיום DMEM המכיל 10% FBS, 4 mM L-Glutamine, 4.5 g/L Glucose, 1.5 g/L NaHCO3 ו-1.0 mM Sodium pyruvate. יש להחליף את המדיום 2 עד 3 פעמים בשבוע.

תנאי גידול: 

תאי AGS נשמרים באינקובטור לח (בטמפרטורה של 37°C) עם אספקת CO2 של 5%.

אחסון: 

תאי AGS קפואים נשמרים במקפיאים חשמליים בטמפרטורה הנמוכה מ-150°C או בשלב האדי של חנקן נוזלי לתקופה ארוכה יותר.

תהליך הקפאה ומדיום:

מדיום CM-1 או CM-ACF משמש להקפאת תאי AGS. הקפאת התאים מתבצעת באמצעות תהליך הקפאה איטי המאפשר ירידה של 1°C בלבד בטמפרטורה לדקה ושומר על חיוניות התאים.

תהליך ההפשרה:

תאי אפיתל קיבה קפואים מעורבבים במהירות באמבט מים בטמפרטורה של 37°C למשך 40 עד 60 שניות. התאים המופשרים מושעים מחדש במדיום תרבית טרי ומועברים לצלחות חדשות לצורך גידול. לאחר 24 שעות של דגירה, התרבית מחודשת כדי להסיר את מרכיבי התרבית הקפואה. בניגוד לכך, תאים שהופשרו עוברים צנטריפוגה, ומרכיבי התרבית הקפואה מוסרים. לאחר מכן, התאים שנאספו מושעים מחדש ומועברים לצלוחית המכילה את התרבית.

רמת בטיחות ביולוגית:

תנאי מעבדה ברמת בטיחות ביולוגית 2 חיוניים לגידול תאי AGS.

 

תאי AGS בהגדלה של פי 20.

קו תאים AGS: יתרונות ומגבלות

חלק זה של המאמר יאיר כמה מהיתרונות והמגבלות העיקריים הקשורים לתאי AGS.

יתרונות

היתרונות העיקריים של תאי AGS אפיתל קיבה הם:

קלות גידול

קו התאים AGS של קרצינומה בקיבה קל לתחזוקה במעבדות לגידול תאים. אין לו דרישות גידול תאים מסובכות או קפדניות. יתר על כן, הוא מפגין מאפייני גידול טובים, מה שהופך אותו לבחירה אידיאלית לחקר הביולוגיה של סרטן הקיבה.

רלוונטיות לסרטן הקיבה

תאי AGS נגזרו מאדנוקרצינומה בקיבה אנושית, מה שהופך אותם לנפוצים במחקר הביולוגיה של קרצינומה בקיבה והתערבויות טיפוליות.

 

מגבלות

המגבלה הקשורה לקו התאים AGS היא:

מודל תאים במבחנה

תאי AGS מתורבתים במעבדות מחקר ביו-רפואיות בתנאים מלאכותיים. לכן, ייתכן שהם אינם משחזרים באופן מלא את הסביבה המיקרו-סביבתית של סרטן הקיבה in vivo ואת האינטראקציות התאיות והמולקולריות האחרות.

 

יישומים של תאי AGS

תאי AGS משמשים באופן ספציפי לחקר הביולוגיה של סרטן הקיבה. יש להם שימושים מבטיחים רבים אחרים בתחום הביו-רפואי. כמה מהשימושים המחקריים המעניינים של תאי AGS הם:

• מחקר סרטן הקיבה: תאי AGS מהווים כלי מחקר מצוין לחקירת המנגנונים התאיים והמולקולריים העומדים בבסיס הצמיחה, הגרורות והפלישה של סרטן הקיבה. חוקרים גם משתמשים בתאי AGS אפיתל קיבה כדי לחקור תהליכים תאיים שונים, מוטציות גנטיות ומסלולי איתות בהתפתחות סרטן הקיבה. מחקר שפורסם ב-Oncology Reports (2019) מצא כי microRNA-183-5p.1 מעודד התרבות, נדידה ופלישה של תאי הגידול על ידי עיכוב מסלול האיתות Bcl 2/P53. בנוסף, הוא גם מווסת כלפי מטה את הגן TPM1 כדי להפעיל השפעות אלה. לפיכך, הן microRNA והן TPM1 מוצעים כיעדים מולקולריים יעילים לפיתוח טיפולים ממוקדים נגד סרטן הקיבה [2].
• סינון תרופות: תאי AGS משמשים בדרך כלל לסינון תרופות חדשות ויעילות נגד סרטן הקיבה. חוקרים מעריכים את הציטוטוקסיות והיעילות של תרופות פוטנציאליות באמצעות קו התאים AGS. כמו כן, נערכו מחקרים לזיהוי מטרות מולקולריות חדשות ופיתוח טיפולים ממוקדים חדשניים למאבק בקרצינומות של הקיבה. מחקר שנערך בשנת 2021 השתמש בתאי סרטן הקיבה AGS ובחן את ההשפעה הטיפולית של התרופה פקליטקסל. הממצאים העלו כי פקליטקסל גורם לקטסטרופה מיטוטית, מנגנון אינטגרלי של אפופטוזיס או מוות תאי בתאי AGS. בנוסף, הוא גם קידם אוטופגיה בתאי סרטן הקיבה [3].
• אינטראקציות בין מארח לפתוגן: קו תאי הסרטן AGS משמש גם לחקר אינטראקציות בין מארח לפתוגן. דבר זה מסייע לחוקרים להבין את המנגנונים והתגובות התאיים המעורבים בזיהום. לדוגמה, במחקר שנערך בשנת 2020 נצפה כי RNA קטן שאינו מקודד, הנמצא בשלפוחיות הקרום החיצוני של הליקובקטר פילורי, מפחית את הפרשת האינטרלוקין 8 בתאי AGS אנושיים [4]. 

5. פרסומים מחקריים בנושא קו התאים AGS

חלק זה של המאמר יסקור כמה פרסומים מחקריים מעניינים ומצוטטים ביותר העוסקים בתאי AGS.

סלידרוסיד גורם לאפופטוזיס ולאוטופגיה מגנה בתאי AGS של סרטן הקיבה האנושי באמצעות מסלול PI3K/Akt/mTOR

מחקר זה, שפורסם בכתב העת Biomedicine & Pharmacotherapy (2020), הציע כי סלידרוסיד, תרכובת טבעית, מעורר אוטופגיה מגנה ומוות תאי בתאי AGS של אפיתל הקיבה באמצעות ויסות מסלול האיתות PI3K/AKT/mTOR.

פוליסכריד אסטראגלוס שיפר את ההשפעות האנטי-סרטניות של אפטניב בתאי AGS של סרטן הקיבה על ידי עיכוב מסלול האיתות AKT

מחקר זה פורסם בכתב העת Biomedicine & Pharmacotherapy (2018). הוא בחן את ההשפעות האנטי-סרטניות הסינרגטיות של פוליסכריד אסטראגלוס והתרופה אפטניב בתאי AGS. ממצאי המחקר חשפו כי אסטראגלוס משפר את ההשפעות האנטי-סרטניות של אפטניב באמצעות דיכוי מסלול האיתות של AKT.

Curcuzedoalide תורם לציטוטוקסיות של קני שורש Curcuma zedoaria כנגד תאי AGS של סרטן קיבה אנושי באמצעות גרימת אפופטוזיס

מחקר זה, שפורסם בכתב העת Journal of Ethnopharmacology (2018), הציע כי קורקוזדואליד, תרכובת טבעית מצמח Curcuma zedoaria Roscoe, תורמת לפוטנציאל הציטוטוקסיות שלו כנגד תאי AGS.

ביטוי יתר של FOXA1 מעכב את התרבות התאים ואת המעבר האפיתליאלי-מזנכימלי (EMT) של תאי AGS מסרטן הקיבה האנושי

פרסום זה בכתב העת Gene (2018) הציע כי ויסות יתר של FOXA1 מדכא את התרבות תאי אדנוקרצינומה בקיבה מסוג AGS ואת המעבר האפיתליאלי-מזנכימלי (EMT) והפלישה.

sncRNAs הארוזים על ידי שלפוחיות הממברנה החיצונית של Helicobacter pylori ממתנים את הפרשת IL-8 בתאים אנושיים

מאמר מחקר זה פורסם ב-International Journal of Medical Microbiology בשנת 2020. במחקר זה נעשה שימוש בתאי AGS כדי לחקור אינטראקציות בין הפתוגן למאכסן. הממצאים חשפו כי Helicobacter pylori מכיל RNA לא מקודד בוויסולות הממברנה החיצונית שלו, המשפיע על רמות ה-IL-8 בתאי AGS.

משאבים עבור קו תאי AGS: פרוטוקולים, סרטונים ועוד

להלן מספר משאבים העוסקים בתאי AGS.

• פרוטוקול טרנספקציה של תאי AGS: סרטון זה הוא מדריך מפורט שלב אחר שלב ללימוד פרוטוקול הטרנספקציה של תאי AGS אפיתל קיבה.

הקישור הבא מכיל את פרוטוקול תרבית תאי AGS.

• פרוטוקול לגידול תאי AGS: אתר זה מכיל מידע שימושי אודות מצעי גידול לתאי AGS ופרוטוקולים לגידול תאים. בקצרה, הוא מספק פרוטוקול לגידול משני של תאי AGS אפיתל קיבה ולטיפול בתרבויות AGS מתרבות ומוקפאות.
• תרבית משנה של תאי AGS: אתר זה מסביר בפירוט את הליך תרבית המשנה של תאי AGS.

מקורות

1. Phuc, B.H., et al., גנומיקה השוואתית של שני זנים וייטנאמיים של Helicobacter pylori, CHC155 מחולה בסרטן קיבה שאינו בקרדיאלי ו-VN1291 מחולה בכיב תריסריון. דוחות מדעיים, 2023. 13(1): עמ' 8869.
2. Lin, J., et al., miRNA‑183‑5p. 1 מקדם את הנדידה והפלישה של תאי AGS בסרטן הקיבה על ידי מיקוד ב-TPM1 תיקון ב-10.3892/or. 2020.7902. דוחות אונקולוגיה, 2019. 42(6): עמ' 2371-2381.
3. Khing, T.M., et al., ההשפעה של פקליטקסל על אפופטוזיס, אוטופגיה וקטסטרופה מיטוטית בתאי AGS. דוחות מדעיים, 2021. 11(1): עמ' 23490.
4. Zhang, H., et al., sncRNAs ארוזים על ידי שלפוחיות קרום חיצוני של Helicobacter pylori ממתנים את הפרשת IL-8 בתאים אנושיים. International Journal of Medical Microbiology, 2020. 310(1): עמ' 151356.