Células AGS – Exploração das células AGS de adenocarcinoma gástrico em estudos sobre o câncer

As células AGS constituem uma linhagem celular de adenocarcinoma gástrico humano amplamente utilizada na pesquisa biomédica. Em particular, são empregadas para estudar a biologia do câncer gástrico, incluindo o crescimento, o desenvolvimento, a progressão e as intervenções terapêuticas do tumor. Além disso, são utilizadas para investigar as interações entre o hospedeiro e o patógeno.

 

Características gerais e origem das células AGS

É necessário conhecer a origem e as características gerais de uma linhagem celular antes de começar a trabalhar com ela. Esta seção abordará o seguinte: O que são as células AGS? Qual é a origem da célula AGS? Qual é a morfologia da linhagem celular cancerosa AGS?

• A linha celular AGS foi derivada do tecido gástrico de uma mulher caucasiana de 54 anos com adenocarcinoma gástrico. Ela foi isolada em 1979 [1].
• As células AGS apresentam morfologia de tipo epitelial.
• As células epiteliais gástricas AGS são hiperdiplóides. O número modal de cromossomos para as células AGS é 49, o que ocorre em quase 60% das células. A poliploidia também ocorre em aproximadamente 3,6% das células.

Carcinoma de estômago em corte transversal ao microscópio.

Informações sobre o cultivo da linha celular AGS

Para o manuseio e manejo adequados de uma linha celular, é necessário conhecer os conceitos básicos de cultura. Em particular, você deve aprender: Qual é o tempo de duplicação das células AGS? Qual é o meio de cultura das células AGS? Como se realiza a subcultura das células AGS? Quais meios de congelamento são utilizados para as células epiteliais gástricas AGS?

Pontos-chave para o cultivo de células AGS

Tempo de duplicação:

O tempo de duplicação das células AGS varia entre 24 e 48 horas.

Adesivas ou em suspensão:

As células AGS são aderentes. Elas crescem formando monocamadas.

Densidade de semeadura:

As células AGS são semeadas a uma densidade de 1 x 10^⁴ células/cm². Nessa densidade, as células formam uma monocamada confluente em 3 a 5 dias. Após a remoção do meio antigo, as células são enxaguadas com PBS 1x e incubadas com a solução de dissociação Accutase. As células desprendidas foram ressuspensas em meio de cultura e centrifugadas. O sedimento celular foi novamente ressuspenso e, após a contagem das células AGS, elas são transferidas para um novo frasco para crescimento.

Meio de crescimento:

Para a cultura de células AGS, utiliza-se meio DMEM contendo 10% de FBS, 4 mM de L-glutamina, 4,5 g/L de glicose, 1,5 g/L de NaHCO₃ e 1,0 mM de piruvato de sódio. O meio deve ser trocado de 2 a 3 vezes por semana.

Condições de crescimento: 

As células AGS são mantidas em uma incubadora umidificada (à temperatura de 37 °C) com um suprimento de 5% de CO₂.

Armazenamento: 

As células AGS congeladas são mantidas em freezers elétricos a temperaturas inferiores a -150 °C ou na fase de vapor de nitrogênio líquido por um período mais prolongado.

Processo de congelamento e meio:

Utiliza-se o meio CM-1 ou CM-ACF para congelar as células AGS. O congelamento celular é realizado por meio de um processo de congelamento lento, que permite apenas uma queda de 1 °C na temperatura por minuto e protege a viabilidade celular.

Processo de descongelamento:

As células epiteliais gástricas congeladas são agitadas rapidamente em um banho-maria a 37 °C por 40 a 60 segundos. As células descongeladas são ressuspensas em meio de cultura fresco e transferidas para novos frascos para crescimento. Após 24 horas de incubação, o meio é renovado para remover os componentes do meio de congelamento. Por outro lado, as células descongeladas são centrifugadas, e os elementos do meio de congelamento são removidos. Em seguida, as células colhidas são novamente ressuspensas e transferidas para o frasco contendo o meio de cultura.

Nível de biossegurança:

Ambientes laboratoriais com nível de biossegurança 2 são essenciais para o cultivo de células AGS.

 

Células AGS com ampliação de 20x.

Linha celular AGS: vantagens e limitações

Esta seção do artigo irá esclarecer algumas das principais vantagens e limitações associadas às células AGS.

Vantagens

As principais vantagens das células epiteliais gástricas AGS são:

Fácil de cultivar

A linha celular AGS de carcinoma gástrico é facilmente mantida em laboratórios de cultura celular. Ela não apresenta requisitos complicados ou exigentes para a cultura celular. Além disso, apresenta boas características de crescimento, tornando-a uma escolha ideal para o estudo da biologia do câncer gástrico.

Relevância para o câncer gástrico

As células AGS foram derivadas de um adenocarcinoma gástrico humano, o que as torna amplamente utilizadas para o estudo da biologia do carcinoma gástrico e de intervenções terapêuticas.

 

Limitações

A limitação associada à linha celular AGS é:

Modelo celular in vitro

As células AGS são cultivadas em laboratórios de pesquisa biomédica sob condições artificiais. Portanto, elas podem não reproduzir totalmente o microambiente do câncer gástrico in vivo e outras interações celulares e moleculares.

 

Aplicações das células AGS

As células AGS são utilizadas especificamente para estudar a biologia do câncer gástrico. Elas têm muitas outras aplicações promissoras no campo biomédico. Algumas das aplicações de pesquisa interessantes das células AGS são:

• Estudo do câncer gástrico: as células AGS são uma excelente ferramenta de pesquisa para investigar os mecanismos celulares e moleculares subjacentes ao crescimento, à metástase e à invasão do câncer gástrico. Os pesquisadores também utilizam células epiteliais gástricas AGS para estudar diferentes processos celulares, mutações genéticas e vias de sinalização no desenvolvimento do câncer gástrico. Um estudo publicado na revista *Oncology Reports* (2019) descobriu que o microRNA-183-5p.1 estimula a proliferação, a migração e a invasão das células tumorais ao inibir a cascata de sinalização Bcl-2/P53. Além disso, ele também regula negativamente o gene TPM1 para exercer esses efeitos. Assim, tanto o microRNA quanto o TPM1 são sugeridos como alvos moleculares eficazes para o desenvolvimento de terapias direcionadas contra o câncer gástrico [2].
• Triagem de medicamentos: as células AGS têm sido comumente utilizadas para a triagem de novos e eficazes medicamentos contra o câncer gástrico. Os pesquisadores avaliam a citotoxicidade e a eficácia de potenciais medicamentos utilizando a linhagem celular AGS. Também foram realizados estudos para identificar novos alvos moleculares e desenvolver novas terapias direcionadas para combater carcinomas gástricos. Uma pesquisa realizada em 2021 utilizou células de câncer gástrico AGS e estudou o efeito terapêutico do medicamento paclitaxel. Os resultados revelaram que o paclitaxel induz uma catástrofe mitótica, um mecanismo essencial da apoptose ou morte celular nas células AGS. Além disso, ele também promoveu a autofagia nas células de câncer gástrico [3].
• Interações hospedeiro-patógeno: A linhagem celular cancerosa AGS também é utilizada para estudar as interações hospedeiro-patógeno. Isso ajuda os pesquisadores a compreender os mecanismos celulares e as respostas envolvidas em uma infecção. Por exemplo, um estudo realizado em 2020 observou que pequenos RNAs não codificantes presentes nas vesículas da membrana externa da Helicobacter pylori diminuem a secreção de interleucina 8 em células AGS humanas [4]. 

5. Publicações científicas sobre a linhagem celular AGS

Esta seção do artigo abordará algumas publicações de pesquisa interessantes e mais citadas que tratam das células AGS.

A salidrosida induz apoptose e autofagia protetora em células AGS de câncer gástrico humano por meio da via PI3K/Akt/mTOR

Este estudo publicado na revista *Biomedicine & Pharmacotherapy* (2020) propôs que o salidrosídeo, um composto natural, induz autofagia protetora e morte celular em células epiteliais gástricas AGS por meio da modulação da via de sinalização PI3K/AKT/mTOR.

O polissacarídeo de Astragalus potencializou os efeitos antitumorais do apatinibe em células AGS de câncer gástrico ao inibir a via de sinalização AKT

Este estudo foi publicado na revista Biomedicine & Pharmacotherapy (2018). Ele explorou os efeitos anticâncer sinérgicos do polissacarídeo de astrágalo e do medicamento apatinibe em células AGS. Os resultados do estudo revelaram que o astrágalo potencializa os efeitos antitumorais do apatinibe por meio da supressão da sinalização da AKT.

A curcuzedoalida contribui para a citotoxicidade dos rizomas de Curcuma zedoaria contra células AGS de câncer gástrico humano por meio da indução de apoptose

Esta pesquisa, publicada no Journal of Ethnopharmacology (2018), propôs que a curcuzedoalida, um composto natural da planta Curcuma zedoaria Roscoe, contribui para seu potencial citotóxico contra as células AGS.

A superexpressão de FOXA1 inibe a proliferação celular e a transição epitelial-mesenquimal (EMT) das células AGS do câncer gástrico humano

Esta publicação na revista *Gene* (2018) propôs que a regulação positiva do FOXA1 suprime a proliferação das células do adenocarcinoma gástrico AGS, bem como a transição epitelial-mesenquimal (EMT) e a invasão.

Os sncRNAs transportados pelas vesículas da membrana externa do Helicobacter pylori atenuam a secreção de IL-8 em células humanas

Este artigo de pesquisa foi publicado na revista International Journal of Medical Microbiology em 2020. Neste estudo, células AGS foram utilizadas para investigar as interações hospedeiro-patógeno. Os resultados revelaram que o Helicobacter pylori contém alguns RNAs não codificantes em suas vesículas da membrana externa que afetam os níveis de IL-8 nas células AGS.

Recursos para a linhagem celular AGS: protocolos, vídeos e muito mais

A seguir, apresentamos alguns recursos sobre as células AGS.

• Protocolo de transfecção de células AGS: este vídeo é um guia passo a passo para aprender o protocolo de transfecção de células epiteliais gástricas AGS.

O link a seguir contém o protocolo de cultura de células AGS.

• Protocolo de cultura de células AGS: este site contém informações úteis sobre meios de cultura para células AGS e protocolos de cultura celular. Resumidamente, ele fornece um protocolo para subcultura de células epiteliais gástricas AGS e para o manuseio de culturas AGS em proliferação e criopreservadas.
• Subcultura de células AGS: Este site explica detalhadamente o procedimento de subcultura de células AGS.

Referências

1. Phuc, B.H., et al., Genômica comparativa de duas cepas vietnamitas de Helicobacter pylori: CHC155, proveniente de um paciente com câncer gástrico não cardíaco, e VN1291, proveniente de um paciente com úlcera duodenal. Scientific Reports, 2023. 13(1): p. 8869.
2. Lin, J., et al., O miRNA-183-5p.1 promove a migração e a invasão de células AGS de câncer gástrico ao ter como alvo o TPM1. Corrigenda em /10.3892/or.2020.7902. Oncology Reports, 2019. 42(6): p. 2371-2381.
3. Khing, T.M., et al., O efeito do paclitaxel na apoptose, autofagia e catástrofe mitótica em células AGS. Scientific Reports, 2021. 11(1): p. 23490.
4. Zhang, H., et al., Os sncRNAs transportados pelas vesículas da membrana externa do Helicobacter pylori atenuam a secreção de IL-8 em células humanas. International Journal of Medical Microbiology, 2020. 310(1): p. 151356.