ETK-1

A ETK-1 é uma linhagem celular de colangiocarcinoma intra-hepático humano (IHCCA), originalmente isolada do líquido ascítico de um paciente adulto com colangiocarcinoma sarcomatóide. O tumor do qual a ETK-1 foi derivada apresentava componentes tanto de adenocarcinoma tubular quanto sarcomatóide, e a linhagem celular reflete o fenótipo sarcomatóide. As células ETK-1 crescem de forma aderente como uma monocamada epitelial uniforme com aparência de paralelepípedos, composta principalmente por pequenas células poligonais com núcleos redondos a ovais e nucléolos proeminentes. As células em passagens iniciais apresentaram um tempo de duplicação populacional de aproximadamente 70 horas e um cariótipo hiperdiplóide com um número modal de cromossomos na faixa de 70, consistente com a instabilidade cromossômica típica de neoplasias malignas agressivas do trato biliar.

Do ponto de vista imunofenotípico, as células ETK-1 expressam marcadores epiteliais biliares, incluindo γ-glutamil transpeptidase (GGT), citoqueratina 18 (CK18) e citoqueratina 19 (CK19), confirmando sua origem colangiocítica. Elas são negativas para marcadores associados aos hepatócitos, como a alfa-fetoproteína (AFP) e a albumina, em condições basais. As células ETK-1 expressam vimentina, refletindo suas características sarcomatóides e fenótipo mesenquimal parcial, ao mesmo tempo em que não apresentam expressão do antígeno carcinoembrionário (CEA) e do antígeno carboidrático 19-9 (CA19-9). Esse perfil de marcadores corresponde ao componente sarcomatóide observado no tumor primário e destaca características consistentes com propriedades semelhantes à transição epitelial-mesenquimal.

A ETK-1 também tem sido utilizada como modelo para estudar a plasticidade celular e a diferenciação de linhagens no colangiocarcinoma. O tratamento com o inibidor da metiltransferase de DNA 5-azacitidina induziu alterações morfológicas e fenotípicas, resultando em uma linhagem celular derivada com características semelhantes às dos hepatócitos, incluindo a expressão de AFP, albumina, integrina α1 e trombopoietina, juntamente com a perda de certos marcadores biliares. Em modelos de xenoenxertos, células ETK-1 não tratadas formam tumores consistentes com adenocarcinoma tubular, apresentando um fenótipo ductal. Esses achados demonstram que a ETK-1 mantém a plasticidade de diferenciação e serve como um valioso sistema in vitro para investigar a transdiferenciação epitelial biliar para hepatocítica, a regulação epigenética e a heterogeneidade tumoral no colangiocarcinoma intra-hepático.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.