Skip to content
ETK-1
Tissue
แพร่กระจาย
Disease
มะเร็งทางเดินน้ำดี
Metastatic site
น้ำในช่องท้อง
Synonyms
ETK1

Documents

ETK-1

Cell line · Product number 305529

ETK-1 is a human intrahepatic cholangiocarcinoma (IHCCA) cell line originally established from the ascitic fluid of an adult patient with sarcomatoid chol...

€550.00excl. tax and shipping

Customization / Recommendations

In stock
Lot
Recommended (freshest lot)
  • CoA
1

01General information

Description

ETK-1 เป็นสายเซลล์มะเร็งทางท่อน้ำดีในตับ (IHCCA) ของมนุษย์ ซึ่งถูกสร้างขึ้นครั้งแรกจากน้ำท้องของผู้ป่วยผู้ใหญ่ที่เป็นมะเร็งทางท่อน้ำดีแบบซาร์โคมาโตอิด ก้อนมะเร็งที่ ETK-1 ถูกแยกออกมาแสดงทั้งส่วนอะดีโนคาร์ซิโนมาแบบท่อและส่วนแบบซาร์โคมาโตอยด์ และสายเซลล์นี้สะท้อนลักษณะทางฟีโนไทป์แบบซาร์โคมาโตอยด์ เซลล์ ETK-1 เติบโตแบบยึดติดกันเป็นชั้นเซลล์เยื่อบุผิวชั้นเดียวที่มีลักษณะคล้ายหินปูถนน ประกอบด้วยเซลล์รูปหลายเหลี่ยมขนาดเล็กเป็นหลัก ซึ่งมีนิวเคลียสทรงกลมถึงรูปไข่ และมีนิวเคลียลที่เด่นชัด เซลล์ในระยะการเพาะเลี้ยงต้นแสดงเวลาเพิ่มจำนวนประชากรประมาณ 70 ชั่วโมง และแบบโครโมโซมไฮเปอร์ไดพลอยด์ โดยมีจำนวนโครโมโซมโมดัลอยู่ในช่วงกลาง 70 ซึ่งสอดคล้องกับความไม่เสถียรของโครโมโซมที่เป็นลักษณะเฉพาะของมะเร็งทางเดินน้ำดีชนิดก้าวร้าว

ในด้านอิมมูโนฟีโนไทป์ เซลล์ ETK-1 แสดงตัวบ่งชี้ของเซลล์เยื่อบุทางเดินน้ำดี รวมถึง γ-กลูตามิล ทรานส์เปปทิเดส (GGT), ไซโตเคราติน 18 (CK18) และ ไซโตเคราติน 19 (CK19) ซึ่งยืนยันว่าเซลล์เหล่านี้มีต้นกำเนิดจากเซลล์โคแลนจิโอไซต์ เซลล์เหล่านี้ให้ผลลบต่อตัวบ่งชี้ที่เกี่ยวข้องกับเซลล์ตับ เช่น α-fetoprotein (AFP) และอัลบูมิน ในสภาวะพื้นฐาน เซลล์ ETK-1 แสดงการออกซิเดชันของวีเมนติน ซึ่งสะท้อนถึงลักษณะแบบซาร์โคมาโตอิดและฟีโนไทป์เมเซนไคมัลบางส่วน ในขณะที่ไม่มีแสดงการออกซิเดชันของแอนติเจนคาร์ซิโนเอ็มบริโอเนน (CEA) และแอนติเจนคาร์โบไฮเดรต 19-9 (CA19-9) โปรไฟล์มาร์เกอร์นี้สอดคล้องกับส่วนที่มีลักษณะคล้ายเนื้อร้ายที่สังเกตได้ในก้อนมะเร็งต้นกำเนิด และเน้นย้ำถึงลักษณะที่สอดคล้องกับคุณสมบัติคล้ายการเปลี่ยนผ่านจากเซลล์เยื่อบุสู่เซลล์เมเซนไคมัล (epithelial-mesenchymal transition)

ETK-1 ยังถูกใช้เป็นแบบจำลองเพื่อศึกษาความยืดหยุ่นของเซลล์และการแยกสายพันธุ์ในมะเร็งทางท่อน้ำดี การรักษาด้วยสารยับยั้ง DNA methyltransferase 5-azacytidine ได้ก่อให้เกิดการเปลี่ยนแปลงทางสัณฐานวิทยาและฟีโนไทป์ ซึ่งนำไปสู่การสร้างสายเซลล์อนุพันธ์ที่มีลักษณะคล้ายเซลล์ตับ รวมถึงการแสดงออกของ AFP, อัลบูมิน, อินทิกริน α1 และทรอมโบโพเอติน พร้อมกับการสูญเสียตัวบ่งชี้ทางท่อน้ำดีบางชนิด ในแบบจำลองการปลูกถ่ายข้ามชนิด (xenograft), เซลล์ ETK-1 ที่ไม่ได้รับการรักษาจะก่อตัวเป็นก้อนมะเร็งที่สอดคล้องกับมะเร็งต่อมท่อแบบท่อ (tubular adenocarcinoma) ซึ่งแสดงลักษณะทางฟีโนไทป์แบบท่อ (ductal phenotype) ผลการวิจัยนี้แสดงให้เห็นว่า ETK-1 ยังคงรักษาความยืดหยุ่นในการเปลี่ยนแปลงการแยกตัว และทำหน้าที่เป็นระบบทดลองในหลอดทดลองที่มีค่าสำหรับการศึกษาการเปลี่ยนรูปแบบจากเซลล์เยื่อบุทางเดินน้ำดีเป็นเซลล์ตับ การควบคุมทางเอพิเจเนติก และความหลากหลายของเนื้องอกในมะเร็งท่อน้ำดีในตับ

Tissue
แพร่กระจาย
Disease
มะเร็งทางเดินน้ำดี
Metastatic site
น้ำในช่องท้อง
Synonyms
  • ETK1

02Classification

Organism
Human
Sex
Female
Growth properties
Adherent
Biosafety level
1

03Identifiers

Citation
ETK-1 (หมายเลขแคตตาล็อก Cytion 305529)
NCBI TaxID
9606
Cellosaurus
CVCL_1206

04Expression and susceptibility

Mutational profile
การกลายพันธุ์: p.Arg175His, โฮโมไซกัส

05Handling and culture

Culture medium
RPMI 1640, w: 2.0 mM กลูตามีนเสถียร, w: 2.0 กรัม/ลิตร NaHCO3 (หมายเลขบทความ Cytion 820700a)
Incubation atmosphere

37°C, 5%CO2, บรรยากาศชื้น

Supplements
เติมอาหารเลี้ยงเชื้อด้วย FBS 10%
Dissociation reagent
Accutase, 5 นาที, 37°C
Subculturing
นำอาหารเลี้ยงเซลล์เก่าออกจากเซลล์ที่เกาะติดและล้างด้วย PBS ที่ไม่มีแคลเซียมและแมกนีเซียม สำหรับขวด T25 ให้ใช้ PBS 3-5 มล. และสำหรับขวด T75 ให้ใช้ 5-10 มล. จากนั้นปิดเซลล์ให้มิดด้วย Accutase โดยใช้ 1-2 มล. สำหรับขวด T25 และ 2.5 มล. สำหรับขวด T75ปล่อยให้เซลล์บ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 8-10 นาทีเพื่อให้เซลล์หลุดออกจากกัน หลังจากบ่มแล้ว ให้ผสมเซลล์เบา ๆ กับอาหารเลี้ยงเซลล์ 10 มิลลิลิตรเพื่อทำให้เซลล์แขวนลอยอีกครั้ง จากนั้นปั่นเหวี่ยงที่ 300 เท่าของแรงโน้มถ่วงโลก (300xg) เป็นเวลา 3 นาที เทส่วนใสที่ได้ทิ้งไป แล้วแขวนลอยเซลล์ในอาหารเลี้ยงเซลล์ใหม่ จากนั้นถ่ายเซลล์ไปยังขวดเพาะเลี้ยงใหม่ที่เติมอาหารเลี้ยงเซลล์ใหม่ไว้แล้ว
Seeding density
1 ถึง 3 x 104 เซลล์/เซนติเมตร²
Fluid renewal
2 ถึง 3 ครั้งต่อสัปดาห์
Post-thaw recovery
หลังจากละลายน้ำแข็งแล้ว ให้เพาะเซลล์ในจานเพาะเลี้ยงที่ความหนาแน่น 5 x 104 เซลล์ต่อตารางเซนติเมตร และปล่อยให้เซลล์ฟื้นตัวจากกระบวนการแช่แข็งและยึดเกาะกับพื้นผิวเป็นเวลาอย่างน้อย 24 ชั่วโมง
Thawing and culturing
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

  7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

06Quality control and cryopreservation

Freeze medium
ในฐานะที่เป็นสารอาหารสำหรับการแช่แข็ง เราใช้สารอาหารสำหรับการเจริญเติบโตแบบครบถ้วน + 10% DMSO เพื่อความมีชีวิตหลังการละลายที่เพียงพอ
Storage conditions

สำหรับการเก็บรักษาในระยะยาว ให้วางหลอดบรรจุในไนโตรเจนเหลวในสถานะไอที่อุณหภูมิประมาณ −150 ถึง −196 °C การเก็บรักษาที่อุณหภูมิ −80 °C สามารถใช้ได้เฉพาะในระยะสั้นก่อนการย้ายไปยังไนโตรเจนเหลวเท่านั้น

Shipping conditions

เซลล์ไลน์ที่แช่แข็งในไนโตรเจนเหลวจะถูกจัดส่งในบรรจุภัณฑ์ที่ผ่านการตรวจสอบแล้วและมีการเก็บรักษาความเย็นด้วยน้ำแข็งแห้ง พร้อมสารทำความเย็นที่เพียงพอเพื่อรักษาอุณหภูมิประมาณ −78 °C ตลอดการขนส่ง เมื่อได้รับสินค้า ให้ตรวจสอบภาชนะทันทีและถ่ายโอนหลอดทดลองไปยังที่เก็บที่เหมาะสมโดยไม่ล่าช้า

07Donor

Donor age
61 ปี
Ethnicity
ญี่ปุ่น