HROC348

A HROC348 é uma linhagem celular de carcinoma colorretal humano derivada de um tumor primário ressecado de um paciente adulto do sexo masculino diagnosticado com câncer de cólon sigmóide. O tumor foi classificado como um adenocarcinoma moderadamente avançado (T3, G3, N2), indicando invasão local significativa e comprometimento linfonodal, o que é consistente com um comportamento tumoral agressivo. O carcinoma teve origem no cólon sigmóide, um local anatômico comum para o câncer colorretal esporádico, e apresentou estabilidade de microssatélites (MSS), o que o alinha ao subtipo de instabilidade cromossômica (CIN), em vez da classe de tumores colorretais hipermutados com MSI-alto.

O perfil molecular do HROC348 mostra status de tipo selvagem tanto para KRAS quanto para BRAF, sugerindo a ausência de mutações ativadoras comuns nesses genes, frequentemente implicadas na progressão do câncer colorretal e na resistência à terapia. Esse contexto molecular torna a HROC348 particularmente adequada para estudos focados na via de sinalização RAS/RAF não mutada e suas implicações no crescimento tumoral, na resposta terapêutica e nos mecanismos de resistência. A linhagem celular não apresenta o fenótipo de metilação das ilhas CpG (CIMP), o que reforça ainda mais sua classificação no subgrupo convencional (não hipermutado) do câncer colorretal.

Clinicamente, o tumor apresentou metástase linfonodal positiva (LN_pos = 2), mas metástase à distância (M) foi observada apenas uma vez, e não foi registrado envolvimento do cólon do lado direito, o que é consistente com um perfil de câncer colorretal do lado esquerdo. Essas características, combinadas com o status MSS e os marcadores moleculares, posicionam o HROC348 como um modelo representativo para o estudo do adenocarcinoma colorretal do lado esquerdo, com KRAS/BRAF de tipo selvagem e estável em microssatélites. Ele também oferece valor translacional para testes pré-clínicos de terapias direcionadas e agentes imunomoduladores em tumores MSS, que normalmente respondem menos ao bloqueio de pontos-chave imunológicos.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.