L-WRN

A linhagem celular L-WRN é uma linhagem de fibroblastos murinos derivada das células L, que são fibroblastos de camundongo originalmente isolados do tecido conjuntivo. As células L-WRN foram geneticamente modificadas para expressar de forma estável Wnt3a, R-spondin 3 e Noggin. Esses fatores são essenciais para o crescimento e a manutenção de organoides intestinais e culturas de células-tronco. A superexpressão dessas proteínas aumenta a proliferação e a diferenciação das células-tronco intestinais, tornando as células L-WRN uma ferramenta valiosa para o estudo da biologia intestinal e a modelagem de doenças.

Além de sua aplicação na cultura de organoides, as células L-WRN servem como um modelo robusto para a investigação das vias de sinalização Wnt. A sinalização Wnt é fundamental na regulação do destino celular, da proliferação e da migração durante o desenvolvimento e nos tecidos adultos. Ao fornecer uma fonte consistente e controlada de Wnt3a, R-spondin 3 e Noggin, as células L-WRN facilitam a pesquisa sobre os mecanismos moleculares subjacentes a esses processos. Os pesquisadores podem usar essas células para analisar os papéis dessas moléculas de sinalização em vários contextos biológicos, incluindo câncer, regeneração tecidual e biologia do desenvolvimento.

De modo geral, a linhagem celular L-WRN é uma ferramenta poderosa na pesquisa biomédica devido à sua capacidade de sustentar o crescimento de culturas tridimensionais complexas e à sua utilidade no estudo de vias de sinalização fundamentais. Seu papel no avanço da pesquisa com células-tronco intestinais e suas contribuições para nossa compreensão da sinalização Wnt destacam sua importância no campo da biologia celular e molecular.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.