Skip to content
L-WRN
Tissue
Mô liên kết

Documents

L-WRN

Cell line · Product number 300641

The L-WRN cell line is a murine fibroblast cell line derived from the L cells, which are mouse fibroblasts originally isolated from connective tissue. L-W...

€550.00excl. tax and shipping
In stock
Lot
Recommended (freshest lot)
  • CoA
1

01General information

Description

Dòng tế bào L-WRN là một dòng tế bào sợi của chuột được phân lập từ các tế bào L, vốn là các tế bào sợi của chuột ban đầu được phân lập từ mô liên kết. Các tế bào L-WRN đã được biến đổi gen để biểu hiện ổn định các protein Wnt3a, R-spondin 3 và Noggin. Các yếu tố này đóng vai trò quan trọng trong sự phát triển và duy trì của các tổ chức ruột và văn hóa tế bào gốc. Sự biểu hiện quá mức của các protein này làm tăng cường sự phân chia và biệt hóa của tế bào gốc ruột, khiến các tế bào L-WRN trở thành công cụ quý giá để nghiên cứu sinh học ruột và mô hình hóa bệnh tật.

Ngoài ứng dụng trong nuôi cấy organoid, các tế bào L-WRN còn là mô hình mạnh mẽ để nghiên cứu các con đường tín hiệu Wnt. Tín hiệu Wnt đóng vai trò quan trọng trong việc điều chỉnh số phận tế bào, sự phân chia và di chuyển trong quá trình phát triển và trong các mô người lớn. Bằng cách cung cấp một nguồn ổn định và được kiểm soát của Wnt3a, R-spondin 3 và Noggin, các tế bào L-WRN hỗ trợ nghiên cứu về các cơ chế phân tử cơ bản của các quá trình này. Các nhà nghiên cứu có thể sử dụng các tế bào này để phân tích vai trò của các phân tử tín hiệu này trong các bối cảnh sinh học khác nhau, bao gồm ung thư, tái tạo mô và sinh học phát triển.

Tổng thể, dòng tế bào L-WRN là một công cụ mạnh mẽ trong nghiên cứu y sinh học nhờ khả năng hỗ trợ sự phát triển của các văn hóa ba chiều phức tạp và tính hữu ích của nó trong việc nghiên cứu các con đường tín hiệu quan trọng. Vai trò của nó trong việc thúc đẩy nghiên cứu tế bào gốc ruột và đóng góp của nó vào sự hiểu biết về tín hiệu Wnt nhấn mạnh tầm quan trọng của nó trong lĩnh vực sinh học tế bào và phân tử.

Tissue
Mô liên kết
Applications
văn hóa tế bào 3D

02Classification

Organism
Mouse
Sex
Male
Growth properties
Adherent
GMO status
GMO-S1
GMO status details
GMO-S1: This murine NIH-3T3-derived cell line (L-WRN) contains expression constructs for Wnt3a, R-spondin-3, and Noggin, including SV40 DNA sequences and dual antibiotic markers (hph and Tn5-neo), enabling secretion of these signaling molecules. The inserts are stably present in NIH-3T3-based cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biosafety level
1

03Characteristics

Morphology
Tế bào sợi

04Identifiers

Citation
L-WRN (Số catalog Cytion 300641)
NCBI TaxID
10090
Cellosaurus
CVCL_DA06

05Expression and susceptibility

Protein expression
Wnt-3A, R-spondin, noggin

06Handling and culture

Culture medium
DMEM, chứa: 4,5 g/L glucose, chứa: 4 mM L-glutamine, chứa: 3,7 g/L NaHCO₃, chứa: 1,0 mM natri pyruvate (số hiệu sản phẩm Cytion 820300a)
Incubation atmosphere

37°C, 5%CO₂, môi trường ẩm.

Supplements
Bổ sung 10% huyết thanh bò phôi (FBS) vào môi trường nuôi cấy
Dissociation reagent
Accutase
Subculturing
Loại bỏ môi trường nuôi cấy cũ khỏi các tế bào bám dính và rửa chúng bằng PBS không chứa canxi và magiê. Đối với bình T25, sử dụng 3-5 ml PBS, và đối với bình T75, sử dụng 5-10 ml. Sau đó, phủ hoàn toàn các tế bào bằng Accutase, sử dụng 1-2 ml cho bình T25 và 2,5 ml cho bình T75. Để tế bào ủ ở nhiệt độ phòng trong 8-10 phút để tách chúng ra. Sau khi ủ, nhẹ nhàng trộn tế bào với 10 ml môi trường để tái phân tán chúng, sau đó ly tâm ở 300xg trong 3 phút. Loại bỏ dịch trên, tái phân tán tế bào trong môi trường tươi và chuyển chúng vào các bình mới đã chứa môi trường tươi.
Thawing and culturing
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Quality control and cryopreservation

Sterility

Sự nhiễm khuẩn Mycoplasma được loại trừ bằng cả các phương pháp xét nghiệm dựa trên PCR và các phương pháp phát hiện Mycoplasma dựa trên phát quang.

Để đảm bảo không có nhiễm khuẩn vi khuẩn, nấm hoặc men, các mẫu nuôi cấy tế bào được kiểm tra trực quan hàng ngày.

Freeze medium
Như một môi trường bảo quản đông lạnh, chúng tôi sử dụng môi trường tăng trưởng hoàn chỉnh (bao gồm FBS) + 10% DMSO để đảm bảo độ sống sau khi rã đông, hoặc CM-1 (mã sản phẩm Cytion 800100), bao gồm các chất bảo vệ thẩm thấu và chất ổn định chuyển hóa được tối ưu hóa để cải thiện quá trình phục hồi và giảm stress do đông lạnh gây ra.
Storage conditions

Để bảo quản lâu dài, hãy đặt ống nghiệm vào nitơ lỏng ở pha hơi ở nhiệt độ khoảng −150 đến −196 °C. Việc bảo quản ở −80 °C chỉ được chấp nhận như một bước trung gian ngắn hạn trước khi chuyển sang nitơ lỏng.

Shipping conditions

Các dòng tế bào được bảo quản bằng phương pháp đông lạnh được vận chuyển trên đá khô trong bao bì cách nhiệt đã được kiểm định, kèm theo lượng chất làm lạnh đủ để duy trì nhiệt độ khoảng −78 °C trong suốt quá trình vận chuyển. Khi nhận hàng, hãy kiểm tra ngay lập tức bao bì và chuyển các ống nghiệm sang nơi lưu trữ phù hợp mà không chậm trễ.

08Donor

Breed / subspecies
C3H/An
Donor age
100 ngày