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E11
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E11

Cell line · Artikelnummer 400494

The E11 cell line is a highly specialized murine cell line developed for advanced studies in podocyte function and kidney disease mechanisms. Derived from...

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Anpassung / Empfehlungen

Auftragsfertigung
1

01Allgemeine Informationen

Beschreibung

Die E11-Zelllinie ist eine hochspezialisierte murine Zelllinie, die für fortgeschrittene Studien der Podozytenfunktion und der Mechanismen von Nierenerkrankungen entwickelt wurde. Die E11-Zellen wurden aus den Glomeruli transgener Mäuse gewonnen, die eine temperaturempfindliche Variante des SV40 large T-Antigens exprimieren, und werden durch den IFN-g-induzierbaren H-2kb-Promotor gesteuert. Dieser einzigartige genetische Rahmen erleichtert die bedingte Vermehrung der Zellen in Abhängigkeit von der Umgebungstemperatur, was mit der kontrollierten Expression des T-Antigens übereinstimmt.

Eines der charakteristischen Merkmale der E11-Zelllinie ist ihre phänotypische Stabilität bei umfangreicher Passagierung. Die E11-Zellen behalten über mehr als 40 Passagen hinweg eine konsistente Expression und zelluläre Eigenschaften bei und haben sich als unschätzbar wertvoll für Langzeitstudien erwiesen, ohne dass das bei vielen kultivierten Zelllinien auftretende Problem der phänotypischen Drift auftritt. Diese Stabilität begünstigt ihre Verwendung in wiederholten und ausgedehnten biologischen Experimenten, die ein konsistentes Zellverhalten erfordern.

Was die Proteinexpression betrifft, so weist die E11-Zelllinie ein robustes Profil auf, das für podozytenspezifische Studien unerlässlich ist. Die Zellen exprimieren durchgängig Nephrin, eine wesentliche Komponente der Schlitzdiaphragma-Struktur in Podozyten, neben einer Vielzahl anderer podozytenspezifischer Proteine wie Podocin, CD2AP und Synaptopodin. Diese umfassende Proteinexpression erleichtert die Untersuchung der Podozytenbiologie in einer kontrollierten In-vitro-Umgebung, die den Bedingungen in vivo sehr ähnlich ist. Die Fähigkeit der E11-Zellen, ausgedehnte Zell-Zell-Kontakte zu bilden, unterstreicht zudem ihre Eignung für die Modellierung der Nierenfiltrationsbarrierefunktionen.

Gewebe
Niere

02Klassifizierung

Organismus
Maus
Sex
Nicht näher bezeichnet
Wachstumseigenschaften
Anhänger
GVO-Status
GMO-S1
Angaben zum GVO-Status
GMO-S1: This Immorto Mouse podocyte line contains a temperature‑sensitive SV40 T‑antigen construct enabling conditional immortalization. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biologische Sicherheitsstufe
1

03Merkmale

Zelltyp
Podozyten

04Bezeichner

Quellenangabe
E11 (Cytion Katalognummer 400494)
NCBI-Steuer-ID
10090
Cellosaurus
CVCL_5737

05Expression und Anfälligkeit

Proteinexpression
WT1, Lmx1b, Nephrin, NEPHI, FAT, P-Cadherin, CD2AP, ZO-I, Podocalyxin, Podoplanin, Synpo, Podocin, TRPC6 und GAPDH.

06Handhabung und Kultur

Nährmedium
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabiles Glutamin, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytion-Artikelnummer 820700a)
Inkubationsatmosphäre

33°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Nahrungsergänzungsmittel
Ergänzen Sie das Medium mit 10% FBS
Dissoziationsreagenz
Accutase
Subkultivierung
Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten.
Aussaatdichte
Impfen Sie T75-Zellkulturflaschen mit 1x 104 Zellen/cm2 für den Proliferationsprozess. Halten Sie die Zellen bei 33 Grad Celsius / 5 % CO2, bis die Flasche zu etwa 75 % konfluent ist.
Flüssigkeitswechsel
2 bis 3 Mal pro Woche
Auftauen und Kultivierung
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Sterilität

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir komplettes Wachstumsmedium (einschließlich FBS) + 10 % DMSO für eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen oder CM-1 (Cytion Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektoren und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und kryoinduzierten Stress zu reduzieren.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

08Spender

Rasse / Unterart
(CBA/Ca x C57BL/10)Tg(H2KbtsA58)
Alter des Spenders
Erwachsener