Schützen Sie Ihre Kulturen vor verborgenen Kontaminationen
Mykoplasmen sind kleine prokaryotische Organismen, die zu klein sind, um mikroskopisch sichtbar zu sein, und sich nicht mit gängigen Antibiotika beseitigen lassen. Sie können Wachstum, Proliferation und Morphologie von Zelllinien beeinträchtigen, was zu unzuverlässigen Versuchsergebnissen führen kann.
Ungefähr 15 bis 35 % der kontinuierlichen Zelllinien sind mit Mykoplasmen kontaminiert1,2. Eine regelmäßige Kontrolle wird daher empfohlen, um eine mykoplasmenfreie Umgebung zu gewährleisten.
Zwei Testoptionen
Cytion bietet sowohl Kurzzeit- als auch Langzeittests an
Analysemethoden
Kolorimetrischer Reporter-Assay
Dieser Test ist ein zellbasierter kolorimetrischer Assay. In Gegenwart von Mykoplasmen löst eine Reporter-Zelllinie eine Signalkaskade aus, die die Farbe des Mediums von Rot nach Blau ändert. Der Assay wird in 96-well-Platten durchgeführt und in einem Mikroplatten-Spektrophotometer bei 620 bis 655 nm ausgelesen. Alle Mykoplasmen- und Acholeplasma-Spezies werden nachgewiesen, ebenso wie andere bakterielle Kontaminanten in der Zellkultur.
Isotherme Amplifikation
Ein schneller und zuverlässiger Test auf Basis der isothermen Amplifikation mykoplasmenspezifischer DNA mit Echtzeit-Detektion mithilfe eines DNA-interkalierenden Farbstoffs. Er weist die sechs häufigsten Spezies nach, die für mehr als 95 % der Kontaminationen verantwortlich sind: M. orale, M. hyorhinis, M. arginini, M. fermentans, M. hominis und A. laidlawii. Aufgrund von Sequenzhomologie werden auch andere Spezies nachgewiesen (M. pneumoniae, M. gallisepticum und M. synoviae). Positive und negative Proben werden anhand der Schmelztemperatur (Tm) unterschieden.
Proben
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- Uphoff CC, Drexler HG. Comparative PCR analysis for detection of mycoplasma infections in continuous cell lines. In Vitro Cell Dev Biol Anim. 2002;38(2):79–85. doi:10.1290/1071-2690(2002)038<0079:CPAFDO>2.0.CO;2
- Drexler HG, Uphoff CC. Mycoplasma contamination of cell cultures: incidence, sources, effects, detection, elimination, prevention. Cytotechnology. 2002;39(2):75–90. doi:10.1023/A:1022913015916