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Intrahepatisches Cholangiokarzinom

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Cell line · Artikelnummer 305019

The RBE cell line is a human intrahepatic cholangiocarcinoma (CC) cell line derived from a 64-year-old female patient. This cell line was established alon...

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01Allgemeine Informationen

Beschreibung

Die RBE-Zelllinie ist eine humane intrahepatische Cholangiokarzinom-Zelllinie (CC), die von einer 64-jährigen Patientin stammt. Diese Zelllinie wurde neben einem sarkomatoiden Gegenstück (SSP-25) aus demselben Tumorknoten etabliert, was die Koexistenz von Adenokarzinom und sarkomatoiden Komponenten innerhalb einer einzigen CC-Läsion verdeutlicht. FSME-Zellen zeichnen sich durch ihre epitheliale Morphologie aus. Sie wachsen als Monolayer und haben ein epitheliales Erscheinungsbild, das typisch für Epithelzellen ist.

Phänotypisch exprimiert die FSME-Zelllinie Schlüsselmarker, die mit Cholangiokarzinomen assoziiert sind. Dazu gehören die Zytokeratine CK7 und CK19, Gamma-Glutamyl-Transpeptidase (GGT), carcinoembryonales Antigen (CEA), Kohlenhydrat-Antigen 19-9 (CA19-9) und Vimentin. Darüber hinaus wird in etwa der Hälfte der RBW-Zellen eine Muzinproduktion nachgewiesen, wie die PAS-Färbung (Periodic Acid-Schiff) zeigt. Diese Merkmale bestätigen den Adenokarzinom-Ursprung der FSME-Zellen und unterscheiden sie von der SSP-25-Zelllinie, die keine CEA-, CA19-9- und Mucin-Expression aufweist.

Gewebe
Gallengang
Krankheit
Intrahepatisches Cholangiokarzinom

02Klassifizierung

Organismus
Mensch
Sex
Weiblich
Wachstumseigenschaften
Anhänger
Biologische Sicherheitsstufe
1

03Merkmale

Morphologie
Epithelial

04Bezeichner

Quellenangabe
RBE (Cytion Katalognummer 305019)
NCBI-Steuer-ID
9606
Cellosaurus
CVCL_4896

05Handhabung und Kultur

Nährmedium
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabiles Glutamin, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytion-Artikelnummer 820700a)
Inkubationsatmosphäre

37°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Nahrungsergänzungsmittel
Ergänzen Sie das Medium mit 10% FBS
Dissoziationsreagenz
Accutase
Subkultivierung
Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten.
Flüssigkeitswechsel
2 bis 3 Mal pro Woche
Auftauen und Kultivierung
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Sterilität

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir komplettes Wachstumsmedium (einschließlich FBS) + 10 % DMSO für eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen oder CM-1 (Cytion Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektoren und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und kryoinduzierten Stress zu reduzieren.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

07Spender

Alter des Spenders
64 Jahre