Mine otse sisu juurde
ETK-1
Kude
Metastaatiline
Haigus
Kolangiokartsinoom
Metastaaside asukoht
Astsiit
Sünonüümid
ETK1

Dokumendid

ETK-1

Cell line · Toote number 305529

ETK-1 is a human intrahepatic cholangiocarcinoma (IHCCA) cell line originally established from the ascitic fluid of an adult patient with sarcomatoid chol...

€550.00ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta

Kohandamine / Soovitused

Laos
Lot
Soovitatav (värskeim partii)
  • CoA
1

01Üldine teave

Kirjeldus

ETK-1 on inimese intrahepaatiline kolangiokartsinoomi (IHCCA) rakuliin, mis loodi algselt sarkomatoidse kolangiokartsinoomiga täiskasvanud patsiendi astsiitvedelikust. Kasvaja, millest ETK-1 pärineb, sisaldas nii tubulaarset adenokartsinoomi kui ka sarkomatoidseid komponente, ning rakuliin peegeldab sarkomatoidset fenotüüpi. ETK-1 rakud kasvavad adhesiivselt ühtlase epiteelmonokihina, millel on munakivimuster, koosnedes peamiselt väikestest polügonaalsetest rakkudest, millel on ümmargused kuni ovaalsed tuumad ja silmapaistvad tuumakesed. Varajaste passaažide rakkudel oli populatsiooni kahekordistumisaeg ligikaudu 70 tundi ja hüperdiploidset kariootüüpi, mille modaalne kromosoomide arv oli 70ndate keskel, mis on kooskõlas agressiivsetele sapiteede pahaloomulistele kasvajatele iseloomuliku kromosoomide ebastabiilsusega.

Immunofenotüübiliselt ekspresseerivad ETK-1 rakud sapiteede epiteeli markereid, sealhulgas γ-glutamüültranspeptidaasi (GGT), tsütokeratini 18 (CK18) ja tsütokeratini 19 (CK19), mis kinnitab nende kolangiootsüütilist päritolu. Baasolukorras on need negatiivsed hepatotsüütidega seotud markerite, nagu alfa-fetoproteiini (AFP) ja albumiini suhtes. ETK-1-rakud ekspresseerivad vimentiini, mis peegeldab nende sarkomatoidseid omadusi ja osalist mesenküümse fenotüüpi, samas kui neil puudub kartsinoembrüonaalse antigeeni (CEA) ja süsivesikute antigeeni 19-9 (CA19-9) ekspressioon. See markeriprofiil vastab primaartuumoris täheldatud sarkomatoidsele komponentile ja toob esile tunnuseid, mis on kooskõlas epiteel-mesenküümse ülemineku sarnaste omadustega.

ETK-1-i on kasutatud ka mudelina kolangiokartsinoomi rakkude plastilisuse ja liini diferentseerumise uurimiseks. Ravi DNA-metüültransferaasi inhibiitoriga 5-atsatsütidiiniga indutseeris morfoloogilisi ja fenotüübilisi muutusi, mille tulemusena tekkis derivaatne rakuliin, millel olid hepatotsüütidele sarnased tunnused, sealhulgas AFP, albumiini, integriini α1 ja trombopoeetiini ekspressioon, koos teatud sapiteede markerite kadumisega. Ksenotransplantaadi mudelites moodustavad ravimata ETK-1 rakud kasvajaid, mis vastavad duktaalse fenotüübiga tubulaarsele adenokartsinoomile. Need tulemused näitavad, et ETK-1 säilitab diferentseerumisplastilisuse ja on väärtuslik in vitro süsteem intrahepaatilise kolangiokartsinoomi sapiteede epiteeli hepatotsüütideks ümberdiferentseerumise, epigeneetilise regulatsiooni ja kasvaja heterogeensuse uurimiseks.

Kude
Metastaatiline
Haigus
Kolangiokartsinoom
Metastaaside asukoht
Astsiit
Sünonüümid
  • ETK1

02Klassifikatsioon

Organism
Inimene
Sugu
Naine
Kasvuvõime
Järgija
Bioloogilise ohutuse tase
1

03Tunnused

Viide
ETK-1 (Cytioni katalooginumber 305529)
NCBI maksukood
9606
Cellosaurus
CVCL_1206

04Avaldumine ja vastuvõtlikkus

Mutatsiooniprofiil
Mutatsioon: p.Arg175His, homosügootne

05Käsitlemine ja kasvatamine

Kasvatuskeskkond
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabiilne glutamiin, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytioni artikli number 820700a)
Inkubatsiooni keskkond

37°C, 5%CO2, niisutatud atmosfäär.

Toidulisandid
Täiendada söötme 10% FBS-ga
Dissotsiatsioonireaktiiv
Accutase, 5 min, 37 °C
Kultuuri edasikasvatamine
Eemaldage kleepunud rakkudelt vana söötme ja peske neid PBS-ga, milles puudub kaltsium ja magneesium. T25 kolbide puhul kasutage 3-5 ml PBS-i ja T75 kolbide puhul 5-10 ml. Seejärel katke rakud täielikult Accutase'iga, kasutades 1-2 ml T25 kolbide puhul ja 2,5 ml T75 kolbide puhul. Laske rakkudel inkubeerida 8-10 minutit toatemperatuuril, et need eralduksid. Pärast inkubeerimist segage rakud ettevaatlikult 10 ml söötmega, et neid resuspenseerida, seejärel tsentrifuugige 3 minutit 300xg juures. Visake supernatant ära, suspenseerige rakud uuesti värskes keskkonnas ja viige need uutesse kolvidesse, mis sisaldavad juba värsket keskkonda.
Külvitihedus
1–3 × 10⁴ rakku/cm²
Vedeliku vahetus
2 kuni 3 korda nädalas
Taastumine pärast sulamist
Pärast sulatamist asetage rakud plaadile tihedusega 5 x 104 rakku/cm2 ja laske rakkudel külmutamisprotsessist taastuda ja kinnituda vähemalt 24 tunni jooksul.
Sulatamine ja kasvatamine
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

  7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

06Kvaliteedikontroll ja krüokonserveerimine

Külmutuskeskkond
Krüosäilitusvedelikuna kasutame täielikku kasvukeskkonda + 10% DMSO, et tagada piisav elujõulisus pärast sulatamist.
Säilitamistingimused

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Tarne- ja kohaletoimetamistingimused

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

07Annetaja

Doonori vanus
61 aastat
Etniline kuuluvus
Jaapani