Mine otse sisu juurde
Hep-64.1
Kude
Maksa
Haigus
Hepatotsellulaarne kartsinoom
Sünonüümid
HEP-64.1, 64.1

Dokumendid

Hep-64.1

Cell line · Toote number 400205

The Hep-64.1 hepatoma cell line is derived from a mouse liver tumor, specifically from the C57BL/6Jmouse strain. This cell line is notable for its hepatoc...

€800.00ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta
Laos
Lot
Soovitatav (värskeim partii)
1

01Üldine teave

Kirjeldus

Hep-64.1 hepatoomi rakuliin on saadud hiire maksakasvajast, täpsemalt C57BL/6Jhiiretüvest. See rakuliin paistab silma hepatotsüütilise päritolu poolest, mida kinnitab vahepealsete filamentide valkude analüüs. Hep-64.1 ekspresseerib lihtsaid keratiini K8 ja K18, mis on tüüpilised normaalsetele maksarakkudele, samuti erineval määral vimentiini ja keratiini K19. Need valgumustrid kinnitavad rakuliini hepatotsütaarset iseloomu ja selle liigitamist hepatoomiliiniks.

Hep-64.1 rakuliinil on valdavalt epiteliaalne morfoloogia, mis peegeldab selle päritolu hepatotsüütidest. See morfoloogiline fenotüüp on kooskõlas selle valkude ekspressiooniprofiiliga. Hep-64.1 DNA-sõrmejälje analüüs ei tuvastanud mingeid olulisi struktuurilisi kõrvalekaldeid, mis viitab teatavale genoomilisele stabiilsusele. Siiski täheldati mõningaid muutusi konkreetsete ribade suhtelises intensiivsuses, kui passaažide arv suurenes, mis viitab vähesele genoomilisele varieeruvusele pikemate kultuuriperioodide jooksul.

Vaatamata tuvastatavate p53-mutatsioonide puudumisele hiirte primaarsetes maksakasvajates, leiti in vitro paljunemise käigus mõnes hepatoomiliinis aberratsioone. Hep-64.1 rakuliini analüüsiti p53 ja c-Ha-ras geenide mutatsioonide suhtes. P53-geeni tuvastatavate mutatsioonide puudumine selles liinis varajaste passatsioonide ajal viitab stabiilse geneetilise tausta olemasolule. See rakuliin on väärtuslik mudel hepatotsellulaarse kartsinoomi uurimiseks, andes ülevaate maksa kasvajate tekke aluseks olevatest rakulistest ja molekulaarsetest mehhanismidest.

Kude
Maksa
Haigus
Hepatotsellulaarne kartsinoom
Sünonüümid
  • HEP-64.1
  • 64.1

02Klassifikatsioon

Organism
Hiir
Sugu
Naine
Kasvuvõime
Järgija
Bioloogilise ohutuse tase
1

03Omadused

Morfoloogia
Epiteelilaadsed

04Tunnused

Viide
Hep-64.1 (Cytioni katalooginumber 400205)
NCBI maksukood
10090
Cellosaurus
CVCL_5770

05Avaldumine ja vastuvõtlikkus

Valgu ekspressioon
Keratiin 8, keratiin 18, keratiin 19, vimentiin
Mutatsiooniprofiil
P53 wt

06Käsitlemine ja kasvatamine

Kasvatuskeskkond
DMEM, w: 4,5 g/L glükoosi, w: 4 mM L-glutamiini, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM naatriumpüruvaati (Cytioni artikli number 820300a)
Inkubatsiooni keskkond

37°C, 5%CO2, niisutatud atmosfäär.

Toidulisandid
Täiendada söötme 10% FBS-ga
Dissotsiatsioonireaktiiv
Accutase
Kultuuri edasikasvatamine
Eemaldage kleepunud rakkudelt vana söötme ja peske neid PBS-ga, milles puudub kaltsium ja magneesium. T25 kolbide puhul kasutage 3-5 ml PBS-i ja T75 kolbide puhul 5-10 ml. Seejärel katke rakud täielikult Accutase'iga, kasutades 1-2 ml T25 kolbide puhul ja 2,5 ml T75 kolbide puhul. Laske rakkudel inkubeerida 8-10 minutit toatemperatuuril, et need eralduksid. Pärast inkubeerimist segage rakud ettevaatlikult 10 ml söötmega, et neid resuspenseerida, seejärel tsentrifuugige 3 minutit 300xg juures. Visake supernatant ära, suspenseerige rakud uuesti värskes keskkonnas ja viige need uutesse kolvidesse, mis sisaldavad juba värsket keskkonda.
Vedeliku vahetus
Iga 3 kuni 5 päeva tagant
Sulatamine ja kasvatamine
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvaliteedikontroll ja krüokonserveerimine

Viljatus

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Külmutuskeskkond
Krüosäilitusvedelikusena kasutame täielikku kasvukeskkonda (sh FBS) + 10% DMSO, et tagada piisav elujõulisus pärast sulatamist, või CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüostressi.
Säilitamistingimused

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Tarne- ja kohaletoimetamistingimused

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

08Annetaja

Tõug / alamliik
C57BL/6J
Doonori vanus
Täiskasvanud