Siirry sisältöön
SK-MEL-5-solut
Kudos
Iho
Sairaus
Melanooma
Metastaasikohde
Aksillaarinen imusolmuke
Synonyymit
SK-Mel-5, SK MEL 5, SK.MEL.5, SK-MEL5, SKMel-5, SKMEL-5, SKMEL5, SKMel5, SKmel5, AA-Mel

Asiakirjat

SK-MEL-5-solut

Cell line · Tuotenumero 300157

Tämä on yksi erittäin laajasta melanoomakantojen sarjasta, jonka T. Takahashi ja hänen työryhmänsä ovat eristäneet. Kantoja käytettiin kohdesolujen lähteenä ...

€430.00ilman veroja ja toimituskuluja
Varastossa
Lot
Suositeltava (tuorein erä)
  • CoA
1

01Yleistä tietoa

Kuvaus
Tämä on yksi T. Takahashin ja kumppaneiden eristämistä erittäin laajoista melanoomalinjoista. Linjat toimivat kohdesolujen lähteenä melanoomaspesifisten vasta-aineiden osoittamiseksi tätä tautia sairastavilla potilailla.
Kudos
Iho
Sairaus
Melanooma
Metastaasikohde
Aksillaarinen imusolmuke
Sovellukset
Melanoomatutkimus; ihosyövän biologia; melanooman lääkeherkkyys; tarkistuspisteinhibiittorien arviointi; MAPK/ERK-signaalireitin tutkimukset; solujen migraatio ja invaasio; ksenotransplantaattimallit; NK-solujen ja T-solujen sytotoksisuusmääritykset (kohdesolut)
Synonyymit
  • SK-Mel-5
  • SK MEL 5
  • SK.MEL.5
  • SK-MEL5
  • SKMel-5
  • SKMEL-5
  • SKMEL5
  • SKMel5
  • SKmel5
  • AA-Mel

02Luokittelu

Organismi
Ihminen
Sukupuoli
Nainen
Kasvuominaisuudet
Kiinnittynyt
GMO-status
GMO-vapaa
GMO-statuksen tiedot
No genetic modification; wildtype melanoma cell line isolated by T. Takahashi et al.
Bioturvallisuustaso
1

03Ominaisuudet

Morfologia
Stellate
Solutyyppi
Melanosyytit/melanoomasolut
Kasvaimia aiheuttava
Kyllä, alastomilla hiirillä, muodostaa pahanlaatuisen melanooman
Kaksinkertaistumisaika
noin 24–36 tuntia

04Tunnisteet

Lähdeviite
SK-MEL-5 (Cytionin luettelonumero 300157)
NCBI-verotunnus
9606
Cellosaurus
CVCL_0527

05Ilmentyminen ja alttius

Proteiinin ilmentyminen
P53-positiivinen
Isoentsyymit
PGM1, 1-2, PGM3, 1, ES-D, 1, AK-1, 1, GLO-1, 1-2, G6PD, B, Fenotyypin frekvenssituote: 0.0860
Tuotteet
Melaniini

06Käsittely ja viljely

Viljelyalusta
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamiini, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytionin artikkelinumero 820100a)
Inkubaatioilma

37 °C, 5 %CO2, kostutettu ilmakehä.

Ravintolisät
Täydennetään elatusainetta 10 % FBS:llä ja 1 % NEAA:lla
Dissosiaatioreagenssi
Accutase
Soluviljely
Poista vanha väliaine tarttuneista soluista ja pese ne PBS:llä, josta puuttuu kalsiumia ja magnesiumia. Käytä T25-pulloissa 3-5 ml PBS:ää ja T75-pulloissa 5-10 ml. Peitä sitten solut kokonaan Accutase-valmisteella, käyttäen 1-2 ml T25-pulloissa ja 2,5 ml T75-pulloissa. Anna solujen inkuboitua huoneenlämmössä 8-10 minuuttia solujen irtoamiseksi. Inkuboinnin jälkeen solut sekoitetaan varovasti 10 ml:n väliaineella niiden resuspendoimiseksi ja sentrifugoidaan sitten 300xg:n nopeudella 3 minuutin ajan. Hävitä supernatantti, suspendoi solut uudelleen tuoreeseen väliaineeseen ja siirrä ne uusiin pulloihin, jotka sisältävät jo tuoretta väliaineita.
Jakosuhde
1–3
Kylvötiheys
1 x 104 solua/cm2
Nesteen uusiminen
2-3 kertaa viikossa
Sulamisen jälkeinen palautuminen
Sulattamisen jälkeen levitä solut 5 x 104 solua/cm2 ja anna solujen toipua pakastusprosessista ja kiinnittyä vähintään 24 tunnin ajan.
Sulatus ja viljely
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Laadunvalvonta ja kryosäilytys

Hedelmättömyys

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Jäädytysaine
Kryosäilytysmediana käytämme täydellistä kasvualustaa (mukaan lukien FBS) + 10 % DMSO:ta riittävän sulatuksen jälkeisen elinkelpoisuuden varmistamiseksi tai CM-1:tä (Cytionin luettelonumero 800100), joka sisältää optimoituja osmoprotectantteja ja metabolisia stabilisaattoreita, jotka parantavat elpymistä ja vähentävät kryosäilytyksen aiheuttamaa stressiä.
Säilytysolosuhteet

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Toimitusehdot

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

08Lahjoittaja

Luovuttajan ikä
24 vuotta
Etnisyys
Kaukasialainen