Tartalomra ugrás
HK-2xCRISPR-CAP-D2-mEGFP
Szövet
Endocervix
Betegség
Adenokarcinóma
Áttétes hely
Az elsődleges daganat helye (endocervix)
Szinonimák
HK-2xCRISPR-CAP-D2-mEGFP #272-78, HK CRISPR CAP-D2-mEGFP

Dokumentumok

HK-2xCRISPR-CAP-D2-mEGFP

Cell line · Termékszám 301572

A HK-2xCRISPR-CAP-D2-mEGFP sejtvonal egy genetikailag módosított Hela Kyoto sejtvonal. A CRISPR/Cas9 technológiával létrehozott sejtek a CA...

€800.00adó és szállítási költség nélkül
Kevés a készlet
Lot
Ajánlott (a legfrissebb tétel)
1

01Általános információk

Leírás

A HK-2xCRISPR-CAP-D2-mEGFP sejtvonal egy genetikailag módosított Hela Kyoto sejtvonal. Ezek a CRISPR/Cas9 technológiával létrehozott sejtek a CAP-D2 fehérjét monomerizált, megerősített zöld fluoreszcens fehérjével (mEGFP) fuzionálva expresszálják, lehetővé téve a CAP-D2 dinamikájának valós idejű vizualizálását. A mEGFP marker lehetővé teszi a kutatók számára a fehérje lokalizációjának, a sejteken belüli kereskedelemnek és kölcsönhatásoknak a tanulmányozását.

A genetikai módosítások betekintést nyújtanak a CAP-D2 sejtes jelátvitelben, citoszkeletális szerveződésben és stresszválaszokban betöltött szerepébe. Emellett a fluoreszcens marker javítja az élő sejtek képalkotását és a nagy áteresztőképességű szűrést, ami ezt a sejtvonalat mind az alap-, mind az alkalmazott kutatásokhoz nélkülözhetetlenné teszi.

Szövet
Endocervix
Betegség
Adenokarcinóma
Áttétes hely
Az elsődleges daganat helye (endocervix)
Alkalmazások
A kondenzin I komplex biológiája; a CAP-D2 alegység képalkotása; a kondenzin sztöchiometriája; a kromoszómák szerveződése; a citoszkeleton dinamikája; élő sejtek képalkotása; nagy tartalmú szűrés; CRISPR-knock-in validáció
Szinonimák
  • HK-2xCRISPR-CAP-D2-mEGFP #272-78
  • HK CRISPR CAP-D2-mEGFP

02Osztályozás

Organizmus
Ember
Szex
Nő
Növekedési tulajdonságok
Hűséges
GMO-státusz
GMO-S1
A GMO-státuszra vonatkozó részletek
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains a CRISPR-engineered mEGFP knock-in at the CAP-D2 locus for condensin-complex studies. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biológiai biztonsági szint
1

03Jellemzők

Morfológia
Epithelszerű, mozaikos kő alakú sejtek
Sejttípus
Epithel sejtek

04Azonosítók

Hivatkozás
HK-2xCRISPR-CAP-D2-mEGFP (Cytion katalógusszám: 301572)
NCBI adóazonosító szám
9606
Cellosaurus
CVCL_UR42
Betétes
Az Ellenberg Labor (EMBL)

05Kifejeződés és fogékonyság

Termékek
EGFP (Fokozott zöld fluoreszcens fehérje)

06Kezelés és tenyésztés

Táptalaj
DMEM, w: 4,5 g/L glükóz, w: 4 mM L-Glutamin, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM nátrium-piruvát (Cytion cikkszám 820300a)
Inkubációs környezet

37°C, 5%CO2, párásított légkör.

Kiegészítők
A táptalajt egészítsük ki 10% FBS-szel
Diszociációs reagens
Accutase
Átültetés
Távolítsa el a régi táptalajt a megtapadt sejtekről, és mossa őket kalcium- és magnéziummentes PBS-szel. T25-ös lombikokhoz 3-5 ml PBS-t, T75-ös lombikokhoz pedig 5-10 ml-t használjunk. Ezután fedjük be a sejteket teljesen Accutase-zal, T25 lombikok esetében 1-2 ml-t, T75 lombikok esetében 2,5 ml-t használva. A sejteket 8-10 percig hagyjuk szobahőmérsékleten inkubálni, hogy leváljanak. Az inkubálás után óvatosan keverjük össze a sejteket 10 ml tápfolyadékkal, hogy reszuszpendáljuk őket, majd centrifugáljuk 300xg-nél 3 percig. Dobja el a felülúszót, szuszpendálja újra a sejteket friss tápfolyadékban, és helyezze át őket új lombikokba, amelyek már friss tápfolyadékot tartalmaznak.
Folyadékcsere
hetente 2-3 alkalommal
Felolvasztás és tenyésztés
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Minőségellenőrzés és kriokonzerválás

Meddőség

A mikoplazma-szennyeződést mind a PCR-alapú vizsgálatokkal, mind a lumineszcencia-alapú mikoplazma-kimutatási módszerekkel kizárják.

A bakteriális, gombás vagy élesztőgombás szennyeződés elkerülése érdekében a sejtkultúrákat napi vizuális ellenőrzésnek vetik alá.

Fagyasztóközeg
Krioprezerváló táptalajként teljes növekedési táptalajt (beleértve az FBS-t) + 10% DMSO-t használunk a megfelelő kiolvasztás utáni életképesség érdekében, vagy CM-1-et (Cytion katalógusszám: 800100), amely optimalizált ozmoprotektánsokat és metabolikus stabilizátorokat tartalmaz a regenerálódás fokozása és a krio-indukált stressz csökkentése érdekében.
Tárolási feltételek

Hosszú távú tartósítás céljából helyezze az üvegeket gőzfázisú folyékony nitrogénbe, körülbelül -150 és -196 °C közötti hőmérsékleten. A -80 °C-on történő tárolás csak rövid átmeneti lépésként fogadható el a folyékony nitrogénbe való átvitel előtt.

Szállítási feltételek

A kriokonzervált sejtvonalakat szárazjégen, validált, szigetelt csomagolásban szállítják, elegendő hűtőközeggel, hogy a szállítás során a hőmérsékletet körülbelül -78 °C-on tartsák. Átvételkor azonnal vizsgálja meg a tárolóedényt, és haladéktalanul helyezze át az injekciós üvegeket a megfelelő tárolóhelyre.

08Adományozó

Az adományozó életkora
30 év
Etnikai hovatartozás
Afroamerikai