Przejdź do treści
HK-2xCRISPR-CAP-D2-mEGFP
Chusteczka
Szyjka macicy
Choroba
Gruczolakorak
Miejsce przerzutów
Miejsce występowania guza pierwotnego (wewnętrzna część szyjki macicy)
Synonimy
HK-2xCRISPR-CAP-D2-mEGFP #272-78, HK CRISPR CAP-D2-mEGFP

Dokumenty

HK-2xCRISPR-CAP-D2-mEGFP

Cell line · Numer produktu 301572

Linia komórkowa HK-2xCRISPR-CAP-D2-mEGFP jest genetycznie zmodyfikowaną linią komórkową Hela Kyoto. Komórki te, zmodyfikowane przy użyciu technologii CRISPR/Cas9, wyrażają gen CA...

€800.00bez podatku i kosztów wysyłki

Dostosowanie / Zalecenia

Niski stan magazynowy
Lot
Polecane (najświeższa partia)
1

01Informacje ogólne

Opis

Linia komórkowa HK-2xCRISPR-CAP-D2-mEGFP to genetycznie zmodyfikowana linia komórek Hela Kyoto. Zaprojektowane przy użyciu technologii CRISPR/Cas9, komórki te wyrażają białko CAP-D2 połączone z monomerycznym wzmocnionym zielonym białkiem fluorescencyjnym (mEGFP), umożliwiając wizualizację dynamiki CAP-D2 w czasie rzeczywistym. Marker mEGFP pozwala naukowcom badać lokalizację białek, przemieszczanie się i interakcje w komórkach.

Modyfikacje genetyczne zapewniają wgląd w rolę CAP-D2 w sygnalizacji komórkowej, organizacji cytoszkieletu i odpowiedzi na stres. Dodatkowo, marker fluorescencyjny usprawnia obrazowanie żywych komórek i wysokowydajne badania przesiewowe, czyniąc tę linię komórkową niezbędną zarówno do badań podstawowych, jak i stosowanych.

Chusteczka
Szyjka macicy
Choroba
Gruczolakorak
Miejsce przerzutów
Miejsce występowania guza pierwotnego (wewnętrzna część szyjki macicy)
Zastosowania
Biologia kompleksu kondensyny I; obrazowanie podjednostki CAP-D2; stechiometria kondensyny; organizacja chromosomów; dynamika cytoszkieletu; obrazowanie żywych komórek; przesiewanie o wysokiej zawartości informacji; walidacja metodą CRISPR knock-in
Synonimy
  • HK-2xCRISPR-CAP-D2-mEGFP #272-78
  • HK CRISPR CAP-D2-mEGFP

02Klasyfikacja

Organizm
Człowiek
Seks
Kobieta
Właściwości związane ze wzrostem
Zwolennik
Status GMO
GMO-S1
Szczegółowe informacje dotyczące statusu GMO
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains a CRISPR-engineered mEGFP knock-in at the CAP-D2 locus for condensin-complex studies. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Poziom bezpieczeństwa biologicznego
1

03Cechy charakterystyczne

Morfologia
Komórki podobne do nabłonka o mozaikowym kształcie kamienia
Typ komórki
Komórki nabłonkowe

04Identyfikatory

Źródło
HK-2xCRISPR-CAP-D2-mEGFP (numer katalogowy Cytion 301572)
Numer identyfikacji podatkowej NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_UR42
Wkładca
Laboratorium Ellenberg (EMBL)

05Ekspresja i podatność

Produkty
EGFP (wzmocnione zielone białko fluorescencyjne)

06Postępowanie i hodowla

Pożywka hodowlana
DMEM, w: 4,5 g/l glukozy, w: 4 mM L-glutaminy, w: 3,7 g/l NaHCO3, w: 1,0 mM pirogronianu sodu (numer artykułu Cytion 820300a)
Atmosfera inkubacyjna

37°C, 5%CO2, nawilżona atmosfera.

Suplementy
Uzupełnić podłoże 10% FBS
Odczynnik dysocjacyjny
Accutase
Hodowla komórek w subkulturze
Usuń starą pożywkę z przylegających komórek i przemyj je PBS, który nie zawiera wapnia i magnezu. W przypadku kolb T25 należy użyć 3-5 ml PBS, a w przypadku kolb T75 5-10 ml. Następnie całkowicie pokryj komórki Accutase, używając 1-2 ml dla kolb T25 i 2,5 ml dla kolb T75. Pozwól komórkom inkubować w temperaturze pokojowej przez 8-10 minut, aby je oddzielić. Po inkubacji delikatnie wymieszaj komórki z 10 ml pożywki, aby ponownie je zawiesić, a następnie odwiruj przy 300xg przez 3 minuty. Odrzucić supernatant, ponownie zawiesić komórki w świeżej pożywce i przenieść je do nowych kolb zawierających już świeżą pożywkę.
Odnawianie płynów
2 do 3 razy w tygodniu
Rozmrażanie i hodowla
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola jakości i kriokonserwacja

Bezpłodność

Zanieczyszczenie mykoplazmą jest wykluczane przy użyciu zarówno testów opartych na PCR, jak i metod wykrywania mykoplazmy opartych na luminescencji.

Aby upewnić się, że nie ma zanieczyszczenia bakteriami, grzybami lub drożdżami, hodowle komórkowe są poddawane codziennym kontrolom wizualnym.

Pożywka do zamrażania
Jako pożywki do kriokonserwacji używamy kompletnej pożywki wzrostowej (w tym FBS) + 10% DMSO w celu zapewnienia odpowiedniej żywotności po rozmrożeniu lub CM-1 (numer katalogowy Cytion 800100), która zawiera zoptymalizowane osmoprotektanty i stabilizatory metaboliczne w celu zwiększenia regeneracji i zmniejszenia stresu wywołanego kriokonserwacją.
Warunki przechowywania

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Warunki wysyłki

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.

08Darczyńca

Wiek dawcy
30 lat
Pochodzenie etniczne
Afroamerykanin