Preskoči na vsebino
HK-2xCRISPR-CAP-D2-mEGFP
Tkivo
Endocervix
Bolezen
Adenokarcinom
Mesto metastaze
Lokacija primarnega tumorja (endocerviks)
Sinonimi
HK-2xCRISPR-CAP-D2-mEGFP #272-78, HK CRISPR CAP-D2-mEGFP

Dokumenti

HK-2xCRISPR-CAP-D2-mEGFP

Cell line · Številka izdelka 301572

Celična linija HK-2xCRISPR-CAP-D2-mEGFP je genetsko spremenjena celična linija Hela Kyoto. Te celice, ki so bile ustvarjene s tehnologijo CRISPR/Cas9, izražajo CA...

€800.00brez davka in stroškov poštnine

Prilagajanje / Priporočila

Zaloga je majhna
Lot
Priporočeno (najsvežja pošiljka)
1

01Splošne informacije

Opis

Celična linija HK-2xCRISPR-CAP-D2-mEGFP je gensko spremenjena celična linija Hela Kyoto. Te celice, oblikovane s tehnologijo CRISPR/Cas9, izražajo beljakovino CAP-D2, združeno z monomernim izboljšanim zelenim fluorescenčnim proteinom (mEGFP), kar omogoča vizualizacijo dinamike CAP-D2 v realnem času. Označevalec mEGFP raziskovalcem omogoča preučevanje lokalizacije beljakovin, prometa in interakcij v celicah.

Genetske modifikacije omogočajo vpogled v vlogo CAP-D2 pri celičnem signaliziranju, organizaciji citoskeleta in odzivih na stres. Poleg tega fluorescenčni označevalec izboljša slikanje celic v živo in visoko zmogljivo presejanje, zaradi česar je ta celična linija bistvena za temeljne in uporabne raziskave.

Tkivo
Endocervix
Bolezen
Adenokarcinom
Mesto metastaze
Lokacija primarnega tumorja (endocerviks)
Uporaba
Biologija kompleksa kondenzina I; slikanje podenote CAP-D2; stehiometrija kondenzina; organizacija kromosomov; dinamika citoскеletov; slikanje živih celic; presejanje z visoko vsebnostjo; validacija knock-in z metodo CRISPR
Sinonimi
  • HK-2xCRISPR-CAP-D2-mEGFP #272-78
  • HK CRISPR CAP-D2-mEGFP

02Razvrstitev

Organizem
Človek
Seks
Ženska
Lastnosti rasti
Pripadnik
Status GSO
GMO-S1
Podrobnosti o statusu GSO
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains a CRISPR-engineered mEGFP knock-in at the CAP-D2 locus for condensin-complex studies. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Stopnja biološke varnosti
1

03Značilnosti

Morfologija
Epitelnim celicam podobne celice z obliko mozaičnih kamenčkov
Vrsta celice
Epitelijske celice

04Identifikatorji

Navajanje vira
HK-2xCRISPR-CAP-D2-mEGFP (kataloška številka Cytion 301572)
Davčna identifikacijska številka NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_UR42
Vlagatelj
Laboratorij Ellenberg (EMBL)

05Izražanje in dovzetnost

Izdelki
EGFP (okrepljeni zeleni fluorescenčni protein)

06Ravnanje in gojenje

Gojišče
DMEM, w: 4,5 g/L glukoze, w: 4 mM L-glutamina, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM natrijevega piruvata (številka izdelka Cytion 820300a)
Inkubacijska atmosfera

37 °C, 5 %CO2, vlažno ozračje.

Prehranska dopolnila
Gojišče dopolnite z 10 % FBS
Reagenca za disociacijo
Accutase
Preusmeritev v drugo kulturo
Odstranite staro gojišče z adherentnih celic in jih sperite s PBS, ki ne vsebuje kalcija in magnezija. Za bučke T25 uporabite 3-5 ml PBS, za bučke T75 pa 5-10 ml. Nato celice popolnoma prekrijte z Accutase, pri čemer uporabite 1-2 ml za bučke T25 in 2,5 ml za bučke T75. Celice pustite inkubirati pri sobni temperaturi 8-10 minut, da se ločijo. Po inkubaciji celice nežno premešajte z 10 ml gojišča, da se ponovno suspendirajo, nato jih 3 minute centrifugirajte pri 300xg. Zavrzite supernatant, ponovno suspendirajte celice v svežem gojišču in jih prenesite v nove bučke, ki že vsebujejo sveže gojišče.
Obnova tekočine
2 do 3-krat na teden
Odtaljevanje in gojenje
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola kakovosti in krioprezervacija

Sterilnost

Kontaminacija z mikoplazmo se izključi z uporabo testov na podlagi PCR in metod za odkrivanje mikoplazme na podlagi luminiscence.

Da se zagotovi, da ni kontaminacije z bakterijami, glivami ali kvasovkami, se celične kulture dnevno vizualno pregledujejo.

Medij za zamrzovanje
Kot gojišče za kriokonzervacijo uporabljamo popolno rastno gojišče (vključno s FBS) + 10 % DMSO za ustrezno vitalnost po odmrznitvi ali CM-1 (kataloška številka 800100 podjetja Cytion), ki vključuje optimizirane osmoprotektante in presnovne stabilizatorje za izboljšanje okrevanja in zmanjšanje stresa, povzročenega s kriom.
Pogoji shranjevanja

Za dolgotrajno shranjevanje viale postavite v tekoči dušik v parni fazi pri približno -150 do -196 °C. Shranjevanje pri -80 °C je sprejemljivo le kot kratek vmesni korak pred prenosom v tekoči dušik.

Pogoji dostave

Kriokonzervirane celične linije se pošiljajo na suhem ledu v potrjeni, izolirani embalaži z zadostno količino hladilnega sredstva, da se med prevozom vzdržuje približno -78 °C. Ob prejemu takoj preglejte embalažo in viale nemudoma prenesite v ustrezno skladišče.

08Donator

Starost darovalca
30 let
Etnična pripadnost
Afroameričan