COS-1 sejtek: a génkifejeződés-kutatások egyik legfontosabb sejtváltozat

A COS-1 sejtvonal egy fibroblaszt-szerű sejt, amely majom vese szövetéből származik, és amelyet a kutatók gyakran használnak az SV40 majomvírus vizsgálatához. Ezek a sejtek könnyen transzfektálhatók, és gyakran használják őket rekombináns fehérjék előállítására különböző biokémiai, molekuláris és sejtbiológiai kísérletekhez.

COS-1 sejtvonal: Eredet és általános információk.

Mielőtt bármilyen munkát elkezdenénk egy sejtvonalon, elengedhetetlen, hogy alapvető ismeretekkel rendelkezzünk magáról a sejtvonalról. Ide tartoznak olyan információk, mint a sejtek eredete, izolálásuk módja és jellemzőik. Ebben a részben a COS-1 sejtek alapjaiba fogunk belemélyedni.

Mi a COS-1 sejtvonal?

A COS-1 sejtvonal fibroblaszt-szerű sejtekből áll, amelyeket J.W.F. Cowell és munkatársai hoztak létre először 1981-ben. Ezeket a sejteket úgy állították elő, hogy a CV-1 néven ismert zöld majom hámsejtvonalat a Simian Virus SV40 mutáns formájával transzformálták. Ezt követően a létrehozott COS-1 sejtvonalat alaposan jellemezték, hogy helyreállítsák az SV40 genomnak azt a régióját, amelyet korábban eltávolítottak a replikációs origóból. Ezek a sejtek nagy T-antigéneket és más fehérjéket expresszálnak, amelyek szükségesek a kör alakú genomok, például a plazmidok helyes replikációjához.

Chlorocebus aethiops (afrikai zöldmajom)

A COS-1 sejtek fibroblaszt-szerű morfológiával rendelkeznek, a felületekhez tapadnak, és egyrétegű réteget képeznek. A COS-1 sejtvonalról jelenleg nincsenek ismertek genetikai variánsok. Ugyanakkor a rokon COS-7 sejtvonal szintén a CV-1 sejtekből származik, és hasonló tulajdonságokat mutat.

A COS-1 sejtek előnyei és hátrányai

A COS-1 sejtvonalnak egyedi előnyei és korlátai vannak, amelyeket az alábbiakban tárgyalunk.

Előnyök

• Transzfekciós alkalmasság: A COS-1 sejtvonal könnyen transzfektálható különböző módszerekkel, beleértve a fizikai és kémiai megközelítéseket is.
• Lentivírusok előállítása: A COS-1 sejtvonal megfelelő csomagoló gazda kiváló minőségű rekombináns lentivírus részecskék előállításához további tisztítási lépések nélkül. Ezek a sejtek szilárdan tapadnak a műanyag felületekhez, ami megakadályozza a vírusrészecskéket tartalmazó transzfekciós felülúszók szennyeződését [1].
• Génkifejeződés: A COS-1 sejtvonalat széles körben használják átmeneti és stabil expressziós elemzésekhez, számos rekombináns fehérjét állítva elő az SV40 replikációs origót tartalmazó kör alakú plazmidokkal történő transzfekció révén [2].

Korlátozások

• Nem emberi sejtvonal: Mivel a COS-1 sejtek nem emberi főemlősöktől származnak, az e sejtvonal által előállított rekombináns fehérjék csak laboratóriumi kísérletekhez alkalmasak, és emberi felhasználásra nem ajánlhatók.

A COS-1 sejtek kutatási alkalmazásai

A sejtvonalakkal kapcsolatos megfontolások közül az egyik legfontosabb a kutatási alkalmazások kérdése. Ez a szakasz a COS-1 sejtek legjelentősebb kutatási alkalmazásait mutatja be.

• Rekombináns fehérjék előállítása: A COS-1 sejtvonalat széles körben használják rekombináns fehérjék előállítására az SV40 replikációs origót tartalmazó kör alakú vektorok átmeneti vagy stabil transzfekciója révén. Egy közelmúltbeli tanulmányban biológusok a COS-1 sejtvonalat használták ló-koriongonadotropin előállítására, amely egy reproduktív alkalmazásokra szánt rekombináns reproduktív hormon [3]. Hasonlóképpen, egy másik tanulmányban COS-1 sejteket használtak egy specifikus típusú influenza vírus elleni rekombináns, csirke-eredetű monoklonális antitest előállítására [4].
• Vírusszerű részecskék előállítása: A COS-1 sejtek csomagoló gazdaszervezetként szolgálnak a kiváló minőségű lentivírusok előállításához, és felhasználhatók vírusvakcinák előállítására. Egy tanulmányban a COS-1 sejtvonalat használták nem fertőző, de erősen immunogén dengue-vírus-szerű részecskék előállítására, amelyek hatékony vakcinakandidátumok [5].

4. COS-1 sejtek: Publikációk

Néhány figyelemre méltó publikáció a COS-1 sejtekről:

• Dengue-vírus-szerű részecskék előállítása és tisztítása COS-1 sejtekből: Ez a Bio-Protocolban megjelent publikáció a COS-1 sejtek használatát ismerteti erősen immunogén dengue-vírus-szerű részecskék előállításához.
• Rekombináns ló koriongonadotropin expressziójának elemzése három gazdaszervezetben – E. coli BL21C, Sf rovarsejt-lizátum és COS-1 emlőssejtek: Ebben a tanulmányban a kutatók összehasonlították egy rekombináns reproduktív hormon, például a ló koriongonadotropin előállítását és poszttranszlációs módosítását különböző expressziós rendszerekben, beleértve a COS-1 emlős sejteket is.
• Kullancsok által terjesztett flavivírus-szerű részecskék vizsgálata génterápiás hordozóként: Ebben a tanulmányban COS-1 sejteket használtak kullancsok által terjesztett encephalitis vírus (TBEV) -szerű részecskék előállítására. Ezeket a részecskéket hordozóként javasolják a szükséges replikonok (azaz terápiás gének) szállítására.
• Rekombináns, csirkésített monoklonális antitest előállítása a H9N2 madárinfluenza-vírus neuraminidáz ellen: Az AMB Express folyóiratban megjelent cikkben COS-1 sejteket használtak a H9N2 típusú madárinfluenza-vírus neuraminidáz elleni rekombináns, csirkésített monoklonális antitestek előállításához.
• Emberi Kv-csatornák mosószermentes oldhatósága emlős sejtekben: Ebben a tanulmányban a COS-1 emlős sejtvonalat használták emberi Kv-csatornák expressziójára néhány oldhatósági kísérlet elvégzése céljából.

COS-1 sejtek magas és alacsony sejtkonfluenciánál

A COS-1 sejtvonalhoz kapcsolódó források, beleértve a protokollokat, videókat és egyebeket

Sejtkultúra-protokollok

• COS-1 sejtkultúra: Ez a link értékes információkat tartalmaz a COS-1 sejtek osztásáról, fagyasztásáról és felolvasztásáról.
• COS-1 sejtek: Ez a link alapvető információkat tartalmaz a COS-1 sejtvonalról.

Transzfekciós protokollok

Íme néhány forrás, amely leírja a COS-1 sejtek transzfekciós módszerét.

• COS-1 sejtek átmeneti transzfekciója: Ez a dokumentum a COS-1 sejtvonal átmeneti transzfekciójának protokollját tartalmazza.

A COS-1 sejtvonalhoz kapcsolódó videók

Az alábbi videóforrások segíthetnek a COS-1 sejtek tenyésztésével, fenntartásával és transzfekciójával kapcsolatos általános információk megszerzésében.

• Sejtek átültetése: Ez a videó az emlős sejtvonalak tenyésztésének alapvető gyakorlatát mutatja be.
• Adherens sejtek fagyasztása: Ez a videó információkat tartalmaz az adherens sejtvonalak fagyasztásáról.
• Transzfekciós protokoll: Ez a videó az emlős sejtek transzfekciójának eljárását mutatja be.

COS-1 sejtek tenyésztése

Jellemző

Információ

Duplázódási idő

Körülbelül 48 óra

Adherens vagy szuszpenzióban

A tapadó típusú sejtek egyrétegű rétegként növekednek a tenyésztőedény felületén

Beültetési sűrűség

2–4 x 10^4 sejt/cm²; az adhezív sejteket 1x PBS-sel mossuk, Accutase-szal kezeljük, centrifugáljuk, reszuszpendáljuk, majd új lombikba adagoljuk

Növekedési tápközeg

10% FBS-t tartalmazó Dulbecco módosított Eagle-táptalaj (DMEM); a táptalajt hetente 2–3 alkalommal cserélni kell

Növekedési feltételek (hőmérséklet, CO2)

5% CO2-tartalmú, 37 °C hőmérsékletű, párásított inkubátor szükséges

Tárolás

-150 °C alatti hőmérsékleten, folyékony nitrogén gázfázisában

Fagyasztási eljárás és táptalaj

Lassú fagyasztási módszer, csupán 1 °C-os hőmérsékletcsökkenéssel, CM-1 vagy CM-ACF táptalaj használatával

Felolvasztási folyamat

A fagyasztott sejteket 37 °C-ra beállított vízfürdőben 40–60 másodpercig gyors keverés mellett inkubálva olvasszuk fel. A sejteket centrifugáljuk a fagyasztó közeg eltávolítása érdekében, a pelletet reszuszpendáljuk, és friss táptalajjal ellátott tenyésztőedénybe adagoljuk. Az adhézió körülbelül 24 órát vesz igénybe.

Biológiai biztonsági szint

A COS-1 sejtek kezeléséhez a 1. biológiai biztonsági szint ajánlott

Reméljük, hogy ez a cikk elegendő információval szolgált ahhoz, hogy elindulhasson a COS-1 sejtekkel való munkában. Kérjük, rendeljen tőlünk, ha ezt a sejtvonalat szeretné felhasználni kutatási tanulmányához.

Hivatkozások

1. Smith, S.L. és T. Shioda, A COS-1 majomvese-epiteliális sejtek előnyei csomagoló gazdaként kiváló minőségű rekombináns lentivírusok kis mennyiségű előállításához. Journal of virological methods, 2009. 157(1): 47–54. o.
2. MacKenzie, C.J. és T. Shioda, A COS-1 sejtek mint csomagoló gazdasejtek a lentivírusok előállításához. Current protocols in cell biology, 2011. 50(1): 26.7. 1–26.7. 15.
3. Bhardwaj, A. és társai, A rekombináns ló-koriongonadotropin expressziójának elemzése három gazdaszervezetben: E. coli BL21C, Sf rovarsejt-lizátum és COS-1 emlőssejtek. Indian Journal of Animal Research, 2021. 55(1): 40–45. o.
4. Wang, F. és munkatársai, H9N2 madárinfluenza-vírus neuraminidáz elleni rekombináns csirke-monoklonális antitest előállítása. AMB Express, 2020. 10: 1–7. o.
5. Galula, J.U., G.-J.J. Chang és D.-Y. Chao, Dengue-vírus-szerű részecskék előállítása és tisztítása COS-1 sejtekből. Bio-protocol, 2019. 9(12): e3280–e3280.