Sel COS-1: Sel Andalan dalam Studi Ekspresi Gen

Baris sel COS-1 adalah sel mirip fibroblast yang berasal dari jaringan ginjal monyet dan sering digunakan oleh para peneliti untuk meneliti virus monyet, SV40. Sel-sel ini mudah ditransfeksi dan sering digunakan untuk membuat protein rekombinan untuk berbagai eksperimen biokimia, molekuler, dan biologi sel.

Garis sel COS-1: Asal-usul dan informasi umum.

Sebelum memulai pekerjaan apa pun dengan garis sel, penting untuk memiliki pemahaman mendasar tentang garis sel itu sendiri. Hal ini mencakup informasi seperti asal sel, cara isolasi sel, dan karakteristiknya. Pada bagian ini, kita akan membahas dasar-dasar sel COS-1.

Apa itu garis sel COS-1?

Baris sel COS-1 terdiri dari sel-sel mirip fibroblast yang pertama kali diciptakan oleh J.W.F. Cowell dan rekan-rekannya pada tahun 1981. Sel-sel ini dihasilkan dengan mentransformasi baris sel epitel monyet hijau yang dikenal sebagai CV-1 menggunakan bentuk mutan dari Virus Simian SV40. Setelah itu, garis sel COS-1 yang telah terbentuk dikarakterisasi secara menyeluruh untuk memulihkan wilayah genom SV40 yang sebelumnya telah dihapus dari asal replikasi. Sel-sel ini mengekspresikan antigen T besar dan protein lain yang diperlukan untuk mereplikasi genom sirkular, seperti plasmid, dengan benar.

Chlorocebus aethiops (monyet hijau Afrika)

Sel COS-1 memiliki morfologi mirip fibroblas dan menempel pada permukaan, menyebar membentuk lapisan tunggal. Saat ini belum diketahui adanya varian genetik pada garis sel COS-1. Namun, garis sel terkait, yaitu COS-7, juga berasal dari sel CV-1 dan menunjukkan karakteristik yang serupa.

Kelebihan dan Kekurangan Sel COS-1

Garis sel COS-1 memiliki kelebihan dan keterbatasan yang unik, yang akan kita bahas di bawah ini.

Keunggulan

• Kemudahan transfeksi: Sel COS-1 mudah ditransfeksi menggunakan berbagai metode, termasuk pendekatan fisik dan kimiawi.
• Produksi Lentivirus: Garis sel COS-1 merupakan inang pengemasan yang cocok untuk memproduksi partikel lentivirus rekombinan berkualitas tinggi tanpa langkah pemurnian tambahan. Sel-sel ini menempel erat pada permukaan plastik, yang mencegah kontaminasi supernatant transfeksi yang mengandung partikel virus [1].
• Ekspresi Gen: Garis sel COS-1 banyak digunakan untuk studi analisis ekspresi sementara dan stabil, menghasilkan banyak protein rekombinan melalui transfeksi dengan plasmid sirkular yang mengandung asal replikasi SV40 [2].

Keterbatasan

• Baris sel non-manusia: Karena sel COS-1 berasal dari primata non-manusia, protein rekombinan yang diproduksi oleh baris sel ini hanya cocok untuk eksperimen laboratorium dan tidak direkomendasikan untuk penggunaan pada manusia.

Aplikasi Penelitian Sel COS-1

Salah satu pertimbangan paling penting saat membahas garis sel adalah aplikasi penelitiannya. Bagian ini akan membahas aplikasi penelitian terkemuka dari sel COS-1.

• Produksi protein rekombinan: Garis sel COS-1 secara luas digunakan untuk memproduksi protein rekombinan melalui transfeksi sementara atau stabil dari vektor sirkular yang mengandung asal replikasi SV40. Dalam sebuah studi terbaru, para biologi menggunakan garis sel COS-1 untuk memproduksi gonadotropin korionik kuda, hormon reproduksi rekombinan untuk aplikasi reproduksi [3]. Demikian pula, studi lain menggunakan sel COS-1 untuk memproduksi antibodi monoklonal rekombinan yang dimodifikasi dari ayam terhadap jenis tertentu virus influenza [4].
• Produksi partikel mirip virus: Sel COS-1 berfungsi sebagai inang pengemas untuk produksi lentivirus berkualitas tinggi dan dapat digunakan untuk menghasilkan vaksin virus. Sebuah studi menggunakan garis sel COS-1 untuk memproduksi partikel mirip virus dengue yang tidak menular namun sangat imunogenik, yang merupakan kandidat vaksin yang efektif [5].

4. Sel COS-1: Publikasi

Beberapa publikasi penting mengenai sel COS-1 adalah:

• Produksi dan Pemurnian Partikel Mirip Virus Dengue dari Sel COS-1: Publikasi dalam Bio-Protocol ini menjelaskan penggunaan sel COS-1 untuk memproduksi partikel mirip virus dengue yang sangat imunogenik.
• Analisis ekspresi gonadotropin korionik kuda rekombinan dalam tiga sistem inang - E. coli BL21C, lisat sel serangga Sf, dan sel mamalia COS-1: Dalam studi ini, para peneliti membandingkan produksi dan modifikasi pasca-translasi hormon reproduksi rekombinan, misalnya gonadotropin korionik kuda, pada sistem ekspresi yang berbeda termasuk sel mamalia COS-1.
• Penelitian partikel mirip Flavivirus yang ditularkan oleh kutu sebagai sistem pengantar untuk terapi gen: Studi ini menggunakan sel COS-1 untuk memproduksi partikel mirip virus ensefalitis yang ditularkan oleh kutu (TBEV). Partikel-partikel ini diusulkan sebagai pengangkut untuk mengantarkan replikon yang diperlukan (yaitu gen terapeutik).
• Pembuatan antibodi monoklonal rekombinan yang dimodifikasi ayam terhadap neuraminidase virus influenza unggas H9N2: Artikel yang diterbitkan dalam jurnal AMB Express ini menggunakan sel COS-1 untuk memproduksi antibodi monoklonal rekombinan yang dimodifikasi ayam terhadap neuraminidase virus influenza unggas tipe H9N2.
• Solubilisasi bebas deterjen saluran Kv manusia yang diekspresikan dalam sel mamalia: Dalam studi ini, garis sel mamalia COS-1 digunakan untuk mengekspresikan saluran Kv manusia guna melakukan beberapa eksperimen solubilisasi.

Sel COS-1 pada kepadatan tinggi dan rendah

Sumber daya untuk garis sel COS-1, termasuk protokol, video, dan lainnya

Protokol kultur sel

• Kultur sel COS-1: Tautan ini berisi informasi berharga tentang pemisahan, pembekuan, dan pencairan sel COS-1.
• Sel COS-1: Tautan ini berisi informasi dasar tentang garis sel COS-1.

Protokol transfeksi

Berikut adalah beberapa sumber yang menjelaskan metode transfeksi untuk sel COS-1.

• Transfeksi sementara sel COS-1: Dokumen ini berisi protokol untuk transfeksi sementara garis sel COS-1.

Video terkait garis sel COS-1

Sumber video berikut dapat membantu dalam memperoleh informasi umum mengenai kultur, pemeliharaan, dan transfeksi sel COS-1.

• Pemindahan sel: Video ini membahas praktik dasar kultur untuk garis sel mamalia.
• Pembekuan sel yang melekat: Video ini berisi informasi mengenai pembekuan garis sel yang melekat.
• Protokol transfeksi: Video ini menunjukkan prosedur untuk mentransfeksi sel mamalia.

Kultur sel COS-1

Karakteristik

Informasi

Waktu penggandaan

Sekitar 48 jam

Menempel atau dalam suspensi

Tipe adheren tumbuh sebagai lapisan tunggal di permukaan botol kultur

Kepadatan penaburan

2 hingga 4 x 10^4 sel/cm²; sel yang melekat dicuci dengan 1x PBS, diolah dengan Accutase, disentrifugasi, disuspensi ulang, dan ditempatkan ke dalam botol baru

Media pertumbuhan

Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) yang mengandung 10% FBS; media harus diganti 2 hingga 3 kali seminggu

Kondisi pertumbuhan (suhu, CO₂)

Membutuhkan inkubator yang dilembabkan dengan 5% CO₂ dan suhu 37°C

Penyimpanan

Di bawah suhu -150°C dalam fase uap nitrogen cair

Proses pembekuan dan media

Metode pembekuan lambat dengan penurunan suhu hanya 1 °C menggunakan media CM-1 atau CM-ACF

Proses pencairan

Cairkan sel beku dengan menginkubasi sel dalam penangas air yang disetel pada suhu 37°C selama 40-60 detik dengan pengadukan cepat. Sentrifugasi sel untuk menghilangkan media pembekuan, resuspensi pelet, dan tuangkan ke dalam labu kultur dengan media baru. Adhesi membutuhkan waktu sekitar 24 jam.

Tingkat keamanan biologis

Tingkat keamanan biologis 1 direkomendasikan untuk penanganan sel COS-1

Kami berharap artikel ini telah memberikan informasi yang cukup untuk membantu Anda memulai kerja dengan sel COS-1. Silakan memesan dari kami jika Anda ingin menggunakan garis sel ini untuk penelitian Anda.

Referensi

1. Smith, S.L. dan T. Shioda, Keunggulan sel epitel ginjal monyet COS-1 sebagai inang pengemasan untuk produksi volume kecil virus lentivirus rekombinan berkualitas tinggi. Journal of virological methods, 2009. 157(1): hlm. 47-54.
2. MacKenzie, C.J. dan T. Shioda, Sel COS-1 sebagai inang pengemasan untuk produksi lentivirus. Current Protocols in Cell Biology, 2011. 50(1): hlm. 26.7.1–26.7.15.
3. Bhardwaj, A., dkk., Analisis ekspresi gonadotropin korionik kuda rekombinan dalam tiga sistem inang: E. coli BL21C, lisat sel serangga Sf, dan sel mamalia COS-1. Jurnal Penelitian Hewan India, 2021. 55(1): hlm. 40-45.
4. Wang, F., dkk., Pembuatan antibodi monoklonal rekombinan yang dimodifikasi untuk ayam terhadap neuraminidase virus flu burung H9N2. AMB Express, 2020. 10: hlm. 1-7.
5. Galula, J.U., G.-J.J. Chang, dan D.-Y. Chao, Produksi dan Pemurnian Partikel Mirip Virus Demam Berdarah dari Sel COS-1. Bio-protocol, 2019. 9(12): hlm. e3280-e3280.