29 Oct 2026
การแช่แข็งเซลล์เรืองแสง
การแช่แข็งเซลล์เรืองแสง
การเก็บรักษาเซลล์ที่มีฟลูออเรสเซนต์ต้องพิจารณาอย่างรอบคอบทั้งกระบวนการแช่แข็งและการรักษาเสถียรภาพของโปรตีนฟลูออเรสเซนต์ ที่ Cytion เราได้พัฒนาโปรโตคอลที่เหมาะสมเพื่อให้แน่ใจว่าเซลล์ที่ถูกติดฉลากด้วยฟลูออเรสเซนต์ของคุณจะยังคงมีทั้งความมีชีวิตและความเข้มของฟลูออเรสเซนต์หลังการละลาย
ประเด็นสำคัญ
- โปรตีนเรืองแสงยังคงเสถียรในระหว่างการเก็บรักษาด้วยความเย็นอย่างถูกต้อง
- องค์ประกอบของสารละลายแช่แข็งที่เหมาะสมเป็นสิ่งสำคัญอย่างยิ่งต่อการรักษาการเรืองแสง
- การแช่แข็งที่ควบคุมอัตราการแช่แข็งช่วยเพิ่มการคงอยู่ของฟลูออเรสเซนซ์หลังการละลาย
- ข้อควรพิจารณาพิเศษในการจัดการใช้กับเซลล์ที่แสดงออก GFP และ RFP
- ช่วงเวลาฟื้นตัวหลังการละลายมีผลต่อความเข้มของฟลูออเรสเซนซ์
ความเสถียรของโปรตีนเรืองแสงระหว่างการแช่แข็ง
โปรตีนเรืองแสง โดยเฉพาะ GFP และสายพันธุ์ต่างๆ แสดงให้เห็นถึงความเสถียรที่น่าทึ่งในระหว่างขั้นตอนการแช่แข็งที่เหมาะสม งานวิจัยของเราที่ Cytion โดยเฉพาะกับสายเซลล์เช่นHK EGFP-alpha-tubulin/H2B-mCherry CellsและHK EGFP-H2B Cells พบว่าโปรตีนเรืองแสงยังคงรักษาความสมบูรณ์ของโครงสร้างเมื่อถูกแช่แข็งภายใต้สภาวะที่เหมาะสม กุญแจสำคัญในการเก็บรักษาที่ประสบความสำเร็จอยู่ที่การใช้สารป้องกันการแช่แข็งที่เหมาะสมและการปฏิบัติตามโปรโตคอลมาตรฐานเราขอแนะนำให้ใช้Freeze Medium CM-1 ซึ่งได้รับการพัฒนาขึ้นเป็นพิเศษเพื่อปกป้องโครงสร้างเซลล์และรักษาเสถียรภาพของโปรตีนระหว่างกระบวนการแช่แข็ง เมื่อใช้เทคนิคการแช่แข็งที่เหมาะสม การแสดงออกของโปรตีนเรืองแสงมักจะคงอยู่มากกว่า 90% ของระดับก่อนแช่แข็งหลังการละลาย
ความสำคัญของการควบคุมส่วนประกอบของสารละลายแช่แข็งต่อการรักษาการเรืองแสง
องค์ประกอบของสารละลายแช่แข็งของคุณมีบทบาทสำคัญในการรักษาทั้งความมีชีวิตของเซลล์และความเข้มของฟลูออเรสเซนซ์ ที่ Cytion เราได้พัฒนาสื่อการแช่แข็งเฉพาะทางที่ตอบสนองต่อความท้าทายเฉพาะของการเก็บรักษาเซลล์ฟลูออเรสเซนซ์ สารละลายแช่แข็งFreeze medium CM-ACF ปราศจากเซรั่มของเราได้รับการปรับให้เหมาะสมโดยเฉพาะเพื่อปกป้องโปรตีนฟลูออเรสเซนซ์ระหว่างกระบวนการแช่แข็งสำหรับเซลล์สายพันธุ์ที่ไวต่อแสงฟลูออเรสเซนต์ เช่นเซลล์ HK EGFP-Cap-D2 เราขอแนะนำให้ใช้Freeze Medium CM-1 - 100 มล. ซึ่งมีปริมาณสารป้องกันการแข็งตัวที่เหมาะสมเพื่อป้องกันการเกิดผลึกน้ำแข็งในขณะที่ยังคงความเสถียรของสารเรืองแสง สารละลายนี้มีสมดุลออสโมลาร์และสารป้องกันที่เหมาะสม ทำให้โปรตีนเรืองแสงคงโครงสร้างตามธรรมชาติตลอดกระบวนการแช่แข็งและละลาย ส่งผลให้สัญญาณการเรืองแสงคงที่หลังการละลาย
การแช่แข็งที่อุณหภูมิคงที่: จำเป็นสำหรับการคงสภาพการเรืองแสง
การแช่แข็งแบบควบคุมอัตราเป็นขั้นตอนสำคัญในการรักษาความสมบูรณ์ของโปรตีนเรืองแสงระหว่างการเก็บรักษาในสภาวะเย็นจัด ที่ Cytion งานวิจัยของเราโดยใช้เซลล์สายพันธุ์เรืองแสง เช่นเซลล์ NRK-EGFP-H2B และเซลล์ U2OS-CRISPR-NUP96-SNAP clone no.33แสดงให้เห็นว่าอัตราการลดอุณหภูมิที่ -1°C ต่อนาทีเป็นอัตราที่เหมาะสมที่สุดในการรักษาความเข้มของแสงเรืองแสงวิธีการควบคุมนี้ เมื่อใช้ร่วมกับFreeze medium CM-ACF - serum free - 100 ml ของเรา จะช่วยลดการก่อตัวของผลึกน้ำแข็งที่อาจทำลายโครงสร้างโปรตีนได้อย่างมีประสิทธิภาพ เราแนะนำให้ใช้ภาชนะแช่แข็งที่มีไอโซโพรพานอลหรือตู้แช่แข็งที่สามารถตั้งโปรแกรมได้ เพื่อให้ได้อัตราการทำความเย็นที่สม่ำเสมอ วิธีการนี้ได้รับการพิสูจน์แล้วว่ามีประสิทธิภาพเป็นพิเศษในการรักษาโครงสร้างโปรตีนเรืองแสงที่ซับซ้อน เช่น ที่พบในเซลล์ HK EGFP-LaminA/H2B-mCherry ของเรา