เซลล์ DU-145 - คู่มือฉบับสมบูรณ์สำหรับนักวิจัย

DU-145 เป็นเซลล์ไลน์มะเร็งต่อมลูกหมากของมนุษย์ที่ถูกนำมาใช้อย่างแพร่หลายในงานวิจัยทางชีวการแพทย์ เซลล์เหล่านี้เป็นแบบจำลองที่มีคุณค่าอย่างยิ่งสำหรับการศึกษาชีววิทยาของมะเร็งต่อมลูกหมาก การทดสอบยา และการพัฒนายา นอกจากนี้ นักวิจัยยังใช้เซลล์ DU-145 ในการศึกษาเชิงลึกเกี่ยวกับกลไกโมเลกุลที่อยู่เบื้องหลังการพัฒนา การเจริญเติบโต และการลุกลามของมะเร็งต่อมลูกหมาก

ข้อมูลทั่วไปและแหล่งกำเนิดของสายเซลล์ DU-145

การเข้าใจคุณลักษณะพื้นฐานและแหล่งกำเนิดของเซลล์ไลน์เป็นสิ่งจำเป็นก่อนเริ่มทำงานกับมัน. ส่วนนี้จะให้ความเข้าใจอย่างครอบคลุมเกี่ยวกับลักษณะและแหล่งกำเนิดของเซลล์ไลน์ DU-145. คุณจะได้รู้จัก: เซลล์มะเร็ง DU145 คืออะไร? รูปร่างของเซลล์ DU145 เป็นอย่างไร? ความแตกต่างระหว่าง PC-3 และ DU145 คืออะไร?

• DU-145 เป็นสายพันธุ์เซลล์มะเร็งต่อมลูกหมากของมนุษย์ ซึ่งได้มาจากสมองของชายชาวคอเคเชียน (อายุ 69 ปี) ที่เป็นมะเร็งต่อมลูกหมากแพร่กระจาย สายพันธุ์เซลล์นี้ถูกฝากไว้ครั้งแรกโดย K.R. Stone และคณะ ในปี พ.ศ. 2521
• เช่นเดียวกับเซลล์มะเร็งต่อมลูกหมาก PC-3 เซลล์ DU-145 ก็แสดงตัวรับแอนโดรเจนเช่นกัน อย่างไรก็ตาม เมื่อเซลล์เหล่านี้ได้รับการรักษาด้วยแอนโดรเจนลิแกนด์ พวกมันไม่แสดงกิจกรรมของยีนที่ตอบสนองต่อตัวรับแอนโดรเจน ดังนั้นจึงถือว่าเป็นเซลล์ที่ไม่ขึ้นกับแอนโดรเจน
• เซลล์ DU-145 มีลักษณะทางสัณฐานวิทยาแบบเยื่อบุผิว
• เซลล์ DU-145 เป็นเซลล์ที่มีโครโมโซมน้อยกว่าปกติและมีจำนวนโครโมโซมที่เป็นค่ากลางเท่ากับ 64 พวกมันแสดงโครโมโซมเครื่องหมายหลายชนิด เช่น del (11) (q23), t(11q12q), 16q+, del (1) (p32), และ del (9) (p11)

PC-3 เทียบกับ DU145

ทั้งสองสายพันธุ์ของเซลล์มะเร็งต่อมลูกหมากไม่ขึ้นกับตัวรับแอนโดรเจน พวกมันแตกต่างกันในแง่ของศักยภาพในการก่อเนื้องอกและการแพร่กระจาย เมื่อฉีดเข้าสู่หนูที่ภูมิคุ้มกันบกพร่อง สายพันธุ์เซลล์ PC-3 จะก่อให้เกิดมะเร็งต่อมน้ำเหลืองชนิดอะดีโนคาร์ซิโนมาที่มีความรุนแรงระดับ IV ซึ่งมีการแพร่กระจายสูง ในทางตรงกันข้าม สายพันธุ์เซลล์ DU-145 พัฒนาเป็นมะเร็งต่อมลูกหมากที่มีศักยภาพในการแพร่กระจายในระดับปานกลาง [1]

การรบกวนของไมโครฟิลิเมนต์ในเซลล์มะเร็งต่อมลูกหมากมนุษย์ PC-3

การเพาะเลี้ยงเซลล์ DU-145

สายเซลล์ DU-145 ถูกใช้อย่างแพร่หลายในห้องปฏิบัติการวิจัยมะเร็งต่อมลูกหมาก คุณควรเรียนรู้ประเด็นสำคัญต่อไปนี้เพื่ออำนวยความสะดวกในการเพาะเลี้ยงที่ง่ายและมีประสิทธิภาพ ส่วนนี้จะประกอบด้วยข้อมูลเกี่ยวกับอาหารเลี้ยงเซลล์ DU145, ระยะเวลาในการเพิ่มจำนวนเป็นสองเท่า, สภาพแวดล้อมในการเพาะเลี้ยงเซลล์ และวิธีการปฏิบัติ

จุดสำคัญสำหรับการเพาะเลี้ยงเซลล์ DU-145

เวลาการเพิ่มจำนวนประชากรเป็นสองเท่า:

ระยะเวลาการเพิ่มจำนวนเป็นสองเท่าของ DU-145 อยู่ระหว่าง 30 ถึง 40 ชั่วโมง

ติดกันหรือแขวนลอย:

DU-145 เป็นสายพันธุ์เซลล์ที่เกาะติด

ความหนาแน่นของการหว่านเมล็ด:

เซลล์ DU-145 ถูกเพาะเลี้ยงที่ความหนาแน่นที่แนะนำ 2 x 10⁴ เซลล์/ซม.² ที่ความหนาแน่นนี้ เซลล์จะสร้างชั้นเดียวที่หนาแน่นเกือบสมบูรณ์ภายในเวลาประมาณ 4 วัน สำหรับการเพาะเลี้ยงเซลล์ ให้ล้างเซลล์ด้วย 1 x ฟอสเฟตบัฟเฟอร์เกลือ (phosphate buffer saline) และนำไปบ่มกับสารละลายสำหรับการผ่านเซลล์ (passaging solution) คือ Accutase เป็นเวลา 8 ถึง 10 นาที ที่อุณหภูมิห้อง หลังจากบ่มแล้ว ให้เติมอาหารเลี้ยงเซลล์ใหม่และปั่นเหวี่ยง (centrifuge) เซลล์ที่ตกตะกอนให้เก็บไว้ นำตะกอนเซลล์ที่เก็บได้มาละลายอย่างระมัดระวัง และเทเซลล์ลงในขวดเพาะเลี้ยงเซลล์ใหม่เพื่อนำไปเพาะเลี้ยงต่อไป

อาหารเลี้ยงเชื้อ:

EMEM (Eagle's Minimum Essential Medium) พร้อมสารเสริมสำหรับเลี้ยงเซลล์ ได้แก่ 10% เซรั่มจากเลือดลูกวัว (FBS), 2 มิลลิโมลาร์ L-Glutamine, 2.2 กรัม/ลิตร NaHCO3 และ EBSS สารอาหารจะเปลี่ยนใหม่ทุก 2 ถึง 3 วันต่อสัปดาห์

เงื่อนไขการเจริญเติบโต:

วัฒนธรรม DU-145 ถูกเก็บไว้ในตู้เพาะเลี้ยงที่อุณหภูมิ 37°C พร้อมแหล่งความชื้นและก๊าซคาร์บอนไดออกไซด์ 5%

การเก็บรักษา:

เซลล์ DU-145 ถูกเก็บรักษาในสถานะไอของไนโตรเจนเหลวหรือที่อุณหภูมิต่ำกว่า -150°C ในตู้แช่แข็งไฟฟ้าเพื่อรักษาความมีชีวิตของเซลล์ในระยะยาว

กระบวนการแช่แข็งและตัวกลาง:

แนะนำให้ใช้สื่อแช่แข็ง CM-1 หรือ CM-ACF สำหรับเซลล์มะเร็งต่อมลูกหมาก DU-145 วิธีการแช่แข็งที่เลือกใช้คือวิธีการแช่แข็งช้า ซึ่งอุณหภูมิจะลดลงอย่างค่อยเป็นค่อยไป 1 °C ต่อครั้ง วิธีนี้ช่วยป้องกันไม่ให้เซลล์เกิดการช็อกและช่วยรักษาความมีชีวิตของเซลล์ไว้

กระบวนการละลาย

หลอดเซลล์ DU-145 ที่แช่แข็งจะถูกละลายอย่างรวดเร็วในอ่างน้ำที่อุณหภูมิ 37°C เป็นเวลา 40 ถึง 60 วินาที หลังจากนั้น ใส่เซลล์ลงในอาหารเลี้ยงเชื้อและปั่นเหวี่ยงเพื่อกำจัดส่วนประกอบของอาหารแช่แข็งที่หลงเหลืออยู่ เซลล์ที่เก็บเกี่ยวได้จะถูกแขวนลอยในอาหารเลี้ยงเซลล์และเทลงในขวดเพาะเลี้ยงเพื่อเพิ่มจำนวนเซลล์ การฟื้นตัวจากการแช่แข็งใช้เวลาเกือบ 24 ชั่วโมง

ระดับความปลอดภัยทางชีวภาพ:

การตั้งค่าความปลอดภัยทางชีวภาพระดับ 1 จำเป็นต้องใช้ในการเพาะเลี้ยงเซลล์ไลน์ DU145 ที่ไม่ขึ้นกับตัวรับแอนโดรเจน

เซลล์มะเร็งต่อมลูกหมาก DU-145 ที่กำลังขยาย 10 เท่า และ 20 เท่า

สายเซลล์ DU-145: ข้อได้เปรียบและข้อจำกัด

เช่นเดียวกับเซลล์ไลน์อื่น ๆ เซลล์ไลน์มะเร็งต่อมลูกหมาก DU-145 มีข้อดีและข้อเสียบางประการ คุณสมบัติเหล่านี้สามารถช่วยคุณตัดสินใจในการนำไปใช้ในงานวิจัยของคุณได้ ข้อได้เปรียบหลักและข้อเสียของเซลล์ DU-145 ได้ถูกกล่าวไว้ด้านล่าง

ข้อดี

ข้อดีของเซลล์ DU-145 คือ:

การก่อให้เกิดเนื้องอก

DU-145 เป็นเซลล์ไลน์มะเร็งต่อมลูกหมากที่มีความก้าวร้าวสูงและมีศักยภาพในการแพร่กระจายในระดับปานกลาง ใช้ในการพัฒนาแบบจำลอง DU145 xenograft ในหนูที่มีภูมิคุ้มกันบกพร่องเพื่อศึกษาชีววิทยา การพัฒนา และการเจริญเติบโตของมะเร็งต่อมลูกหมากทั้งในหลอดทดลองและในร่างกาย

การไม่ขึ้นกับตัวรับแอนโดรเจน

เซลล์มะเร็งต่อมลูกหมาก DU-145 ไม่พึ่งพาตัวรับแอนโดรเจนในการเจริญเติบโต และไม่ตอบสนองต่อแอนโดรเจนทั้งในระดับเซลล์และระดับโมเลกุลเมื่อได้รับการรักษาด้วยแอนโดรเจน เหมาะสำหรับการวิจัยกลไกของมะเร็งต่อมลูกหมากที่ไม่พึ่งพาฮอร์โมน

ข้อจำกัด

ข้อจำกัดของเซลล์ไลน์ DU-145 ได้แก่:

แบบจำลองในหลอดทดลอง

DU-145 เป็นแบบจำลองเซลล์ในหลอดทดลองของมะเร็งต่อมลูกหมากที่แพร่กระจาย ดังนั้นอาจไม่สามารถแสดงถึงความซับซ้อนของเนื้องอกต่อมลูกหมากปฐมภูมิได้อย่างสมบูรณ์ นอกจากนี้ อาจไม่ได้บ่งบอกถึงมะเร็งต่อมลูกหมากทุกชนิดและทุกชนิดย่อย เนื่องจากลักษณะเฉพาะ เช่น การไม่พึ่งพาตัวรับแอนโดรเจน

 

การวิจัยการประยุกต์ใช้เซลล์ DU-145

สายพันธุ์เซลล์มะเร็งต่อมลูกหมาก DU-145 มีการใช้งานวิจัยที่หลากหลาย รายการการใช้งานที่มีแนวโน้มดีบางประการได้แสดงไว้ที่นี่

• ชีววิทยาของมะเร็งต่อมลูกหมาก: DU-145 เป็นแบบจำลองที่เกี่ยวข้องในการศึกษาชีววิทยาของมะเร็งต่อมลูกหมาก นักวิจัยใช้เซลล์เหล่านี้เพื่อศึกษาวิถีโมเลกุลที่ขับเคลื่อนการพัฒนา การลุกลาม และการแพร่กระจายของมะเร็ง นอกจากนี้ ยังมีการศึกษาการเปลี่ยนแปลงทางพันธุกรรมที่พบบ่อยในมะเร็งต่อมลูกหมากอีกด้วย การวิจัยที่ดำเนินการในปี 2021 ได้ศึกษาเซลล์ DU-145 เพื่อระบุตัวบ่งชี้ทางชีวภาพที่มีศักยภาพสำหรับการวินิจฉัยและการรักษาที่มีประสิทธิภาพ การศึกษานี้เสนอว่า actin gamma 1 (ACTG1) อาจเป็นตัวบ่งชี้ทางชีวภาพของมะเร็งต่อมลูกหมาก เนื่องจากมันส่งเสริมการเพิ่มจำนวนของเซลล์มะเร็งและควบคุมการแพร่กระจายผ่านการกระตุ้นเส้นทาง MAPK/ERK [2]
• การคัดกรองและพัฒนายา: เซลล์มะเร็งต่อมลูกหมาก DU-145 ถูกนำมาใช้อย่างแพร่หลายในการทดสอบความเป็นพิษต่อเซลล์และประสิทธิภาพของยาต้านมะเร็งที่มีศักยภาพ ซึ่งช่วยให้นักวิจัยสามารถระบุตัวยาใหม่ ทำความเข้าใจการดื้อยา และกลไกโมเลกุลที่อยู่เบื้องหลัง การศึกษาที่ดำเนินการในปี 2022 ได้สำรวจผล cytotoxic ของส่วนผสมของเรซิน, โปรโพลิส หรือกาวผึ้ง ในเซลล์มะเร็งต่อมลูกหมากสายพันธุ์ PC-3 และ DU-145 การศึกษาแสดงให้เห็นถึงผลยับยั้งการเจริญเติบโตของสารธรรมชาตินี้ในทั้งสองสายพันธุ์เซลล์และเสนอศักยภาพในการต่อต้านมะเร็งของมัน [3] มีการศึกษาอีกชิ้นหนึ่งดำเนินการในปี 2019 เพื่อตรวจสอบฤทธิ์ต้านการเพิ่มจำนวนของเซลล์ของสารประกอบธรรมชาติ เบเทน ในเซลล์มะเร็งต่อมลูกหมาก DU-145 การวิจัยแสดงให้เห็นว่าเบต้าอีนมีฤทธิ์ต้านการเจริญเติบโตของเซลล์โดยเพิ่มการตายของเซลล์และการอักเสบที่เกิดจากภาวะเครียดออกซิเดชันในเซลล์ DU-145 [4]

5. สิ่งพิมพ์งานวิจัยที่นำเสนอเซลล์ DU-145

ต่อไปนี้คือเอกสารวิจัยบางฉบับเกี่ยวกับสายเซลล์ DU-145

ผลของซิงค์ซัลเฟตที่ขึ้นกับความเข้มข้นต่อเซลล์มะเร็งต่อมลูกหมากมนุษย์สายพันธุ์ DU-145: การวิเคราะห์เชิงออกซิเดชัน, อะพอพโทซิส, การอักเสบ, และสัณฐานวิทยา

การศึกษาในวารสาร Biological Trace Element Research ปี 2020 ได้เสนอว่า ซิงค์ซัลเฟต (ZnSo₄) มีฤทธิ์ต้านการเจริญเติบโตของเซลล์ในเซลล์ DU-145 ผ่านการเหนี่ยวนำให้เกิดการตายของเซลล์แบบอะพอพโทซิส การเปลี่ยนแปลงทางสัณฐานวิทยา ความเสียหายจากออกซิเดชัน และการอักเสบ

ฤทธิ์ทำลายเซลล์เฉพาะเจาะจงและต้านการแพร่กระจายในเซลล์มะเร็งต่อมลูกหมาก DU-145 ที่เกิดจากสารสกัดจากเปลือกต้นมะขามป้อม (Annona muricata L.) และสารไฟโตเคมีคอล แอนโนนาซิน

บทความวิจัยนี้ได้รับการตีพิมพ์ในวารสาร BMC Complementary Medicine and Therapies ในปี 2020 การศึกษานี้สำรวจศักยภาพในการเป็นพิษต่อเซลล์และการต่อต้านการแพร่กระจายของสารสกัดจากเปลือกต้น Annona muricata L. และสารออกฤทธิ์แอนโนนาซินในเซลล์สายพันธุ์ DU-145

เส้นทางที่เกี่ยวข้องกับ LncRNA LOXL1‐AS1/miR‐let‐7a‐5p/EGFR ควบคุมการดื้อต่อยา doxorubicin ของเซลล์มะเร็งต่อมลูกหมาก DU-145

การตีพิมพ์ใน IUBMB Life (2019) เสนอว่า การมีปฏิสัมพันธ์ของ RNA ที่ไม่เข้ารหัสยาว LOXL1-AS1 กับ miR-let-7a-5p และเส้นทาง EGFR ควบคุมการดื้อต่อยา doxorubicin ในเซลล์มะเร็งต่อมลูกหมาก DU-145

การลดการแสดงออกของ DDR1 กระตุ้นการตายของเซลล์แบบอะพอพโทซิสและยับยั้งการเปลี่ยนผ่านของเซลล์จากเอมบริโอเป็นเซลล์ผู้ใหญ่ (EMT) ผ่านการฟอสโฟรีเลชันของ Pyk2/MKK7 ในเซลล์มะเร็งต่อมลูกหมากสายพันธุ์ DU-145 และ Lncap-FGC

บทความในวารสาร Anti-Cancer Agents in Medicinal Chemistry (2020) ระบุว่า การลดลงของยีน Discoidin Domain Receptor1 (DDR1) ทำให้เซลล์ DU-145 ตายและยับยั้งการเปลี่ยนผ่านจากเซลล์เยื่อบุผิวไปเป็นเซลล์เนื้อเยื่อเกี่ยวพัน (EMT) ผ่านการกระตุ้นเส้นทาง Pyk2/MKK7

Casticin ยับยั้งการเคลื่อนที่และการรุกรานของเซลล์มะเร็งต่อมลูกหมากมนุษย์ DU 145 ผ่านทางสัญญาณ Ras/Akt/NF-κB

การศึกษาในวารสาร Journal of Food Biochemistry (2019) ได้เสนอว่า Casticin ซึ่งเป็นสารโพลีเมทอกซีฟลาโวน สามารถยับยั้งการเคลื่อนที่และการรุกรานของเซลล์ DU-145 โดยการควบคุมสัญญาณ Ras/Akt/NF-κB

ทรัพยากรสำหรับสายเซลล์ DU-145: โปรโตคอล, วิดีโอ, และอื่น ๆ

มีแหล่งข้อมูลออนไลน์มากมายเกี่ยวกับเซลล์มะเร็งต่อมลูกหมากสายพันธุ์ DU-145 ในส่วนนี้จะกล่าวถึงแหล่งข้อมูลบางแห่งที่อธิบายวิธีการจัดการ การบำรุงรักษา และโปรโตคอลการถ่ายโอนยีนในเซลล์เหล่านี้:

• การถ่ายยีน DU-145: วิดีโอสอนนี้เป็นคู่มือแบบทีละขั้นตอนสำหรับการเรียนรู้วิธีการถ่ายยีนในเซลล์ DU-145

โปรโตคอลการเพาะเลี้ยงเซลล์ DU-145 ถูกกล่าวถึงที่นี่

• การเพาะเลี้ยงเซลล์ DU-145: ลิงก์นี้จะช่วยให้คุณเรียนรู้ขั้นตอนวิธีการสำหรับการเพาะเลี้ยงหรือการเพาะเลี้ยงเซลล์ DU-145
• เซลล์ DU-145: เว็บไซต์นี้มีข้อมูลที่เป็นประโยชน์มากมายเกี่ยวกับสายพันธุ์เซลล์ DU-145 รวมถึงอาหารเลี้ยงเซลล์ DU145, โปรโตคอลสำหรับการเพาะเลี้ยงต่อรุ่น, และการจัดการกับวัฒนธรรมที่เพิ่มจำนวนและแช่แข็ง

เอกสารอ้างอิง

1. ลิมา, เอ.อาร์., และคณะ, การแยกแยะระหว่างเอ็กโซเมตาโบโลมของเซลล์ต่อมลูกหมากมนุษย์ปกติและเซลล์มะเร็งโดย GC-MS. รายงานทางวิทยาศาสตร์, 2018. 8(1): หน้า 5539.
2. เซียว, แอล., และคณะ, การยับยั้งการแสดงออกของ ACTG1 กระตุ้นการเปลี่ยนผ่านของเซลล์เยื่อบุผิวต่อมลูกหมากเป็นเซลล์มีเซนไคม์ผ่านเส้นทางสัญญาณ MAPK/ERK. ชีววิทยาดีเอ็นเอและเซลล์, 2021. 40(11): หน้า 1445-1455.
3. โกกาซ, เอ็ม., และคณะ, ฤทธิ์ต้านมะเร็งของสารสกัดจากพรอพอลิสที่ได้จากวิธีการแยกเย็นต่อเซลล์มะเร็งต่อมลูกหมากสายพันธุ์ PC-3 และ DU-145. โมเลกุล, 2022. 27(23): หน้า 8245.
4. Kar, F., et al., เบต้าอีนยับยั้งการเพิ่มจำนวนเซลล์โดยการเพิ่มการตายของเซลล์แบบอะพอพโทซิสและการอักเสบที่เกิดจากภาวะเครียดออกซิเดชันในเซลล์มะเร็งต่อมลูกหมากมนุษย์สายพันธุ์ DU-145. Cell Stress and Chaperones, 2019. 24: หน้า 871-881.