AAV-293

La línea celular AAV-293 es una línea permanente establecida a partir de células renales embrionarias humanas primarias transformadas con ADN del adenovirus humano tipo 5. Los genes codificados por la región E1 del adenovirus (E1a y E1b) se expresan en estas células y participan en la transactivación de los promotores virales, lo que permite que estas células produzcan altos niveles de proteína.

La AAV-293 se deriva de la línea celular parental 293; mediante clonación y múltiples rondas de pruebas, la AAV-293 se selecciona específicamente por su alto nivel de producción de AAV en un sistema sin células auxiliares. Ofrece varias ventajas sobre las células 293 comunes: una mayor superficie celular, lo que da como resultado una mayor transfección y un mejor rendimiento de AAV.

Las ventajas incluyen una morfología aplanada, una adhesión firme a la placa de cultivo, y las células son ideales para el cultivo a gran escala y la producción de AAV. El virus adenoasociado (AAV) pertenece a la familia de los Parvoviridae, un grupo de virus que se encuentra entre los más pequeños de los virus de ADN de cadena simple y sin envoltura.

Hasta la fecha se han descrito nueve serotipos diferentes de AAV. El AAV puede infectar tanto a células en división como a células que no se dividen y puede mantenerse en la célula huésped humana, lo que ofrece la posibilidad de una transferencia génica a largo plazo. El AAV-2 recombinante es el serotipo más común utilizado en la administración de genes y puede producirse en títulos elevados con un virus auxiliar o con células AAV-293.

37 °C, 5 % de CO₂, atmósfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Se descarta la contaminación por micoplasmas mediante ensayos basados en PCR y métodos de detección de micoplasmas basados en luminiscencia.

Para garantizar que no haya contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Para la conservación a largo plazo, coloque los viales en nitrógeno líquido en fase de vapor a una temperatura de entre −150 y −196 °C, aproximadamente. El almacenamiento a −80 °C solo es aceptable como un paso intermedio breve antes de transferirlos al nitrógeno líquido.

Las líneas celulares criopreservadas se envían en hielo seco, en un embalaje aislante validado que contiene suficiente refrigerante para mantener una temperatura de aproximadamente −78 °C durante todo el transporte. Al recibir el envío, revise el contenedor de inmediato y traslade los viales sin demora al lugar de almacenamiento adecuado.

En Cytion, respaldamos la calidad y la viabilidad de nuestros productos. Garantizamos que nuestras células serán viables al inicio del cultivo durante 60 días a partir de la fecha de envío desde nuestras instalaciones. Aseguramos que todos los materiales cumplen con las especificaciones descritas en el Certificado de Análisis y/o la Ficha del Producto.

Para obtener más detalles, consulte nuestra Declaración de garantía.