AAV-293

La lignée cellulaire AAV-293 est une lignée permanente établie à partir de cellules rénales embryonnaires humaines primaires transformées par l’ADN de l’adénovirus humain de type 5. Les gènes codés par la région E1 de l’adénovirus (E1a et E1b) sont exprimés dans ces cellules et participent à la transactivation des promoteurs viraux, ce qui permet à ces cellules de produire des niveaux élevés de protéines.

L’AAV-293 est dérivée de la lignée cellulaire parentale 293; grâce au clonage et à de multiples séries d’essais, l’AAV-293 a été spécifiquement sélectionnée pour sa capacité à produire des niveaux élevés d’AAV dans un système sans cellule auxiliaire. Elle offre plusieurs avantages par rapport aux cellules 293 standard : une plus grande surface cellulaire, ce qui se traduit par une transfection plus efficace et un meilleur rendement en AAV.

Ces cellules présentent une morphologie aplatie, une adhérence solide à la plaque de culture et sont idéales pour la culture à grande échelle et la production d’AAV. Le virus adéno-associé (AAV) appartient à la famille des Parvoviridae, un groupe de virus comptant parmi les plus petits virus à ADN simple brin et non enveloppés.

À ce jour, neuf sérotypes différents d’AAV ont été répertoriés. L’AAV peut infecter aussi bien les cellules en division que celles qui ne se divisent pas et peut être maintenu dans la cellule hôte humaine, ce qui offre la possibilité d’un transfert génique à long terme. L’AAV-2 recombinant est le sérotype le plus couramment utilisé pour l’administration de gènes, et il peut être produit à des titres élevés à l’aide d’un virus auxiliaire ou de cellules AAV-293.

37 °C, 5 % _de CO_₂, atmosphère humidifiée.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes par luminescence.

Afin de s’assurer qu’il n’y a aucune contamination bactérienne, fongique ou par des levures, les cultures cellulaires font l’objet d’inspections visuelles quotidiennes.

Pour une conservation à long terme, placez les flacons dans de l’azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre environ −150 et −196 °C. L’entreposage à −80 °C n’est acceptable qu’à titre d’étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l’azote liquide.

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées dans de la glace sèche, dans un emballage isotherme validé contenant suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d’environ −78 °C pendant tout le transport. À la réception, inspectez immédiatement le conteneur et transférez sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

Chez Cytion, nous garantissons la qualité et la viabilité de nos produits. Nous garantissons que nos cellules seront viables au début de la culture pendant 60 jours à compter de leur expédition depuis nos installations. Nous assurons que tous les matériaux sont conformes aux spécifications décrites dans le certificat d’analyse et/ou la fiche technique du produit.

Pour plus de détails, veuillez consulter notre déclaration de garantie.