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AAV-293
ティッシュ
胚性腎臓
同義語
AAV293

AAV-293

Cell line · 製品番号 305127

AAV-293細胞株は、ヒトアデノウイルス5型のDNAによって形質転換されたヒト胚性腎臓初代培養細胞から樹立された恒常性細胞株である。この細胞株がコードする遺伝子は……

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01概要

説明

AAV-293細胞株は、ヒトアデノウイルス5型DNAで形質転換された初代胚性ヒト腎臓から樹立された永久細胞株である。アデノウイルスのE1領域によってコードされる遺伝子(E1aおよびE1b)はこれらの細胞で発現され、ウイルスプロモーターのトランス活性化に関与し、これらの細胞が高レベルのタンパク質を産生することを可能にする。

AAV-293は親293細胞株から派生したもので、クローニングと複数回のテストを経て、AAV-293はヘルパーフリーのシステムで高レベルのAAV産生ができるように特別に選択されています。AAV-293は、通常の293細胞よりもいくつかの利点があります:細胞表面積が大きいため、AAVのトランスフェクションが高く、収量が高い。

扁平な形態、培養プレートへの強固な接着、大規模培養とAAV生産に理想的な細胞、などの利点があります。アデノ随伴ウイルス(AAV)はパルボウイルス科に属し、一本鎖の非エンベロープDNAウイルスの中でも最も小さなウイルス群です。

現在までに9種類のAAV血清型が報告されている。AAVは分裂している細胞にも分裂していない細胞にも感染することができ、ヒトの宿主細胞内で維持することができるため、長期間の遺伝子導入の可能性がある。組換え型AAV-2は遺伝子導入に使われる最も一般的な血清型であり、ヘルパーウイルスまたはAAV-293細胞を用いて高力価で産生することができる。

ティッシュ
胚性腎臓
同義語
  • AAV293

02分類

生物
人間
セックス
女性
成長特性
アドヘレント
GMOの有無
GMO-S1
GMOのステータスに関する詳細
GMO-S1: This HEK293-derived AAV-293 line contains clonal modifications supporting AAV vector production. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
バイオセーフティレベル
1

03特徴

形態学
上皮

04識別子

引用
AAV-293(Cytion カタログ番号 305127)
NCBI 納税者番号
9606
セロサウルス
CVCL_6871

05取り扱いと飼育

培地
DMEM、w:4.5g/Lグルコース、w:4mM L-グルタミン、w:3.7g/L NaHCO3、w:1.0mMピルビン酸ナトリウム(Cytion品番820300a)
培養雰囲気

37℃、5%CO2、加湿雰囲気。

サプリメント
培地に10% FBS、0.1 mM NEAAを添加する。
解離試薬
アキュターゼ
継代培養
接着した細胞から古いメデュームを取り除き、カルシウムとマグネシウ ムを除いたPBSで洗浄する。T25フラスコでは3-5ml、T75フラスコでは5-10mlのPBSを使用する。次に、T25フラスコでは1-2ml、T75フラスコでは2.5mlのアキュターゼで細胞を完全に覆う。室温で5分間インキュベートし、細胞を剥離させる。インキュベーション後、細胞を10mlの培地と静かに混合して再懸濁させ、300xgで3分間遠心する。上清を捨て、細胞を新しいメデュームに懸濁し、新しいメデュームの入った新しいフラスコに移す。
流体の更新
週2~3回
解凍と培養
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06品質管理と凍結保存

無菌性

マイコプラズマ汚染は、PCRベースのアッセイと発光ベースのマイコプラズマ検出法の両方を用いて除外される。

細菌、真菌、酵母のコンタミネーションがないことを確認するため、細胞培養物は毎日目視検査が行われる。

凍結培地
凍結保存培地としては、融解後の生存率を十分に高めるために完全増殖培地(FBSを含む)+10%DMSO、または回復を促進し凍結によるストレスを軽減するために最適化された浸透保護剤と代謝安定剤を含むCM-1(Cytionカタログ番号800100)を使用している。
保管条件

長期保存の場合、バイアルを-150~-196℃の気相液体窒素に入れる。80℃での保存は、液体窒素に移す前の短い暫定措置としてのみ許容される。

配送条件

凍結保存された細胞株は、輸送中約-78℃を維持するのに十分な保冷剤とともに、有効な断熱包装でドライアイスとともに輸送される。受領後、直ちに容器を検査し、遅滞なくバイアルを適切な保管場所に移してください。

07寄付者

ドナーの年齢
胎児