AAV-293

AAV-293-cellelinjen er en permanent linje, der er etableret fra primære embryonale humane nyrer, der er transformeret med humant adenovirus type 5-DNA. De gener, der kodes af E1-regionen i adenovirus (E1a og E1b), udtrykkes i disse celler og deltager i transaktivering af virale promotorer, hvilket gør det muligt for disse celler at producere høje niveauer af protein.

AAV-293 stammer fra den parentale 293-cellelinje, og gennem kloning og flere testrunder er AAV-293 specifikt udvalgt til et højt niveau af AAV-produktion i et hjælperfrit system. Det giver flere fordele i forhold til de almindelige 293-celler: Større celleoverflade, hvilket resulterer i højere transfektion og bedre udbytte af AAV.

Fordelene er en fladtrykt morfologi, fast vedhæftning til kulturpladen, og cellerne er ideelle til dyrkning i stor skala og AAV-produktion. Adeno-associeret virus (AAV) tilhører familien Parvoviridae, en gruppe vira blandt de mindste enkeltstrengede og ikke-hylstrede DNA-vira.

Der er til dato rapporteret om ni forskellige AAV-serotyper. AAV kan inficere både celler, der deler sig, og celler, der ikke deler sig, og kan bevares i den menneskelige værtscelle, hvilket giver mulighed for langvarig genoverførsel. Rekombinant AAV-2 er den mest almindelige serotype, der bruges til genoverførsel, og den kan produceres i høje koncentrationer med en hjælpevirus eller AAV-293-celler.

37°C, 5%_CO2, befugtet atmosfære.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mycoplasma-kontaminering udelukkes ved hjælp af både PCR-baserede assays og luminescensbaserede mycoplasma-detektionsmetoder.

For at sikre, at der ikke er nogen bakterie-, svampe- eller gærforurening, underkastes cellekulturerne daglige visuelle inspektioner.

For langtidsopbevaring anbringes hætteglas i flydende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Opbevaring ved -80 °C er kun acceptabelt som et kort mellemtrin før overførsel til flydende nitrogen.

Kryopræserverede cellelinjer sendes på tøris i valideret, isoleret emballage med tilstrækkeligt kølemiddel til at opretholde ca. -78 °C under hele transporten. Ved modtagelse skal beholderen straks inspiceres, og hætteglassene skal straks overføres til passende opbevaring.

Hos Cytion står vi inde for vores produkters kvalitet og levedygtighed. Vi garanterer, at vores celler vil være levedygtige ved kulturens start i 60 dage efter afsendelse fra vores faciliteter. Vi sikrer, at alle materialer er i overensstemmelse med de specifikationer, der er beskrevet i analysecertifikatet og/eller produktarket

For alle detaljer henvises til vores <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantierklæring