AAV-293

A linhagem celular AAV-293 é uma linhagem permanente estabelecida a partir de células renais embrionárias humanas primárias transformadas com o DNA do adenovírus humano tipo 5. Os genes codificados pela região E1 do adenovírus (E1a e E1b) são expressos nessas células e participam da transativação dos promotores virais, permitindo que essas células produzam altos níveis de proteína.

A AAV-293 é derivada da linha celular parental 293; por meio de clonagem e várias rodadas de testes, a AAV-293 é especificamente selecionada para um alto nível de produção de AAV em um sistema sem células auxiliares. Ele oferece várias vantagens em relação às células 293 comuns: maior área de superfície celular, resultando em maior transfecção e melhor rendimento de AAV.

As vantagens incluem uma morfologia achatada, forte aderência à placa de cultura, e as células são ideais para cultura em larga escala e produção de AAV. O vírus adeno-associado (AAV) pertence à família Parvoviridae, um grupo de vírus que está entre os menores vírus de DNA de fita simples e sem envelope.

Existem nove sorotipos diferentes de AAV relatados até o momento. O AAV pode infectar tanto células em divisão quanto células que não estão em divisão e pode ser mantido na célula hospedeira humana, criando o potencial para transferência gênica de longo prazo. O AAV-2 recombinante é o sorotipo mais comum utilizado na entrega de genes e pode ser produzido em altos títulos com um vírus auxiliar ou com células AAV-293.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.