AAV-293

Die AAV-293-Zelllinie ist eine permanente Linie, die aus primären embryonalen menschlichen Nieren gewonnen wird, die mit menschlicher Adenovirus Typ 5-DNA transformiert wurden. Die von der E1-Region des Adenovirus kodierten Gene (E1a und E1b) werden in diesen Zellen exprimiert und sind an der Transaktivierung der viralen Promotoren beteiligt, so dass diese Zellen hohe Mengen an Protein produzieren können.

AAV-293 ist von der elterlichen 293-Zelllinie abgeleitet. Durch Klonen und mehrere Testrunden wurde AAV-293 speziell für eine hohe AAV-Produktion in einem helferfreien System ausgewählt. Sie bietet mehrere Vorteile gegenüber den normalen 293-Zellen: Eine größere Zelloberfläche, was zu einer höheren Transfektion und einer besseren Ausbeute an AAV führt.

Die Vorteile sind eine abgeflachte Morphologie, eine feste Anheftung an die Kulturplatte und die ideale Eignung der Zellen für die Kultur in großem Maßstab und die AAV-Produktion. Adeno-assoziierte Viren (AAV) gehören zur Familie der Parvoviridae, einer Gruppe von Viren, die zu den kleinsten einzelsträngigen und unbehüllten DNA-Viren gehören.

Bislang sind neun verschiedene AAV-Serotypen bekannt. AAV können sowohl sich teilende als auch sich nicht teilende Zellen infizieren und in der menschlichen Wirtszelle erhalten bleiben, was die Möglichkeit eines langfristigen Gentransfers eröffnet. Rekombinantes AAV-2 ist der am häufigsten für den Gentransfer verwendete Serotyp und kann mit einem Hilfsvirus oder mit AAV-293-Zellen in hohen Titern produziert werden.

37°C, 5%_CO2, befeuchtete Atmosphäre.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

Bei Cytion stehen wir hinter der Qualität und Lebensfähigkeit unserer Produkte. Wir garantieren, dass unsere Zellen zu Beginn der Kultur für 60 Tage nach dem Versand aus unseren Einrichtungen lebensfähig sind. Wir versichern, dass alle Materialien mit den im Analysezertifikat und/oder Produktblatt beschriebenen Spezifikationen übereinstimmen

Ausführliche Informationen finden Sie in unserer <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantieerklärung