AAV-293

La línea celular AAV-293 es una línea permanente establecida a partir de riñón humano embrionario primario transformado con ADN de adenovirus humano de tipo 5. Los genes codificados por la región E1 del adenovirus (E1a y E1b) se expresan en estas células y participan en la transactivación de los promotores virales, lo que permite a estas células producir altos niveles de proteína.

AAV-293 se deriva de la línea celular 293 parental, a través de la clonación y múltiples rondas de pruebas, AAV-293 se selecciona específicamente para un alto nivel de producción de AAV en un sistema libre de ayudantes. Ofrece varias ventajas sobre las células 293 normales: Mayor superficie celular que resulta en una mayor transfección y mejor rendimiento de AAV.

Las ventajas son una morfología aplanada, una fijación firme a la placa de cultivo y que las células son ideales para el cultivo a gran escala y la producción de AAV. Los virus adenoasociados (AAV) pertenecen a la familia de los Parvoviridae, un grupo de virus entre los más pequeños de ADN monocatenario y sin envoltura.

Hasta la fecha se han descrito nueve serotipos diferentes de AAV. Los AAV pueden infectar tanto células en división como en reposo y pueden mantenerse en la célula huésped humana, lo que ofrece la posibilidad de transferir genes a largo plazo. El AAV-2 recombinante es el serotipo más utilizado en la transferencia de genes y puede producirse a títulos elevados con un virus auxiliar o células AAV-293.

37°C, 5%_CO2, atmósfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminación por micoplasma se excluye utilizando tanto ensayos basados en la PCR como métodos de detección de micoplasma basados en la luminiscencia.

Para garantizar la ausencia de contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Para la conservación a largo plazo, colocar los viales en nitrógeno líquido en fase vapor a una temperatura aproximada de -150 a -196 °C. El almacenamiento a -80 °C sólo es aceptable como breve paso intermedio antes de la transferencia al nitrógeno líquido.

Las líneas celulares crioconservadas se envían en hielo seco en envases validados y aislados con suficiente refrigerante para mantener aproximadamente -78 °C durante el tránsito. A la recepción, inspeccione el envase inmediatamente y transfiera los viales sin demora al almacenamiento adecuado.

En Cytion, respaldamos la calidad y viabilidad de nuestros productos. Garantizamos que nuestras células serán viables al inicio del cultivo durante los 60 días posteriores al envío desde nuestras instalaciones. Aseguramos que todos los materiales se ajustan a las especificaciones descritas en el Certificado de Análisis y/o Hoja de Producto

Para más información, consulte nuestra <a href=""/Quiénes somos/Garantía/"" hreflang=""x-default"">Declaración de garantía